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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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geyihui

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物跑胶 已有8人参与

请问我PCR(ps)产物比模板还要大,我模板是4.3Kb,我全部P,可是出来的条带在marker的5K那边,怎么回事,回事marker的问题吗
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my_father

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-03 23:08:11
geyihui: 金币+1 2015-06-04 13:42:21
扩增后纯化过没?
如果没纯化过可能会结合Buffer中的阳离子,造成电泳速率变慢,再加上产量高上样量高就更显得大了。
如果是这样建议纯化后控制上样量看
9楼2015-06-03 18:50:01
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普通回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
geyihui: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-03 13:21:04
要不然是模板不存,要不就是非特异性扩增,还有就是形成了二聚体。
2楼2015-06-03 10:21:30
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geyihui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-03 10:21:30
要不然是模板不存,要不就是非特异性扩增,还有就是形成了二聚体。

如果是非特异扩增和二聚体都应该不比模板大才对,我的模板是质粒,只有4.3k,可是产物比5k大,实验室小伙伴都没遇到过这个问题
3楼2015-06-03 10:29:45
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

那么就可能是有外来的DNA的污染。
4楼2015-06-03 11:55:20
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zd1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-03 23:07:51
如果只能以质粒为模板进行扩增,那就尝试:1、用不同的试剂盒重新提取质粒,2、重新设计引物,3、优化PCR条件,4、找到包含你目的片段的长片段进行酶切,前提条件是质粒上有这样的酶切位点,又不至于把你的目的片段切断,得到这个长片段之后纯化作为模板再进行PCR。
如果可以从其它途径,例如基因组DNA上扩增你的目的片段,也尝试一下是否可以扩增到正确大小的目的片段。
5楼2015-06-03 16:47:17
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geyihui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zd1213 at 2015-06-03 16:47:17
如果只能以质粒为模板进行扩增,那就尝试:1、用不同的试剂盒重新提取质粒,2、重新设计引物,3、优化PCR条件,4、找到包含你目的片段的长片段进行酶切,前提条件是质粒上有这样的酶切位点,又不至于把你的目的片段 ...

我是在这个质粒为模板的条件下进行定点饱和突变(3个碱基NNN),所以用的这个质粒,好郁闷,引物已经重新设计了,先前是压根就p不出来
6楼2015-06-03 17:07:20
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yhz0626

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
想问一下,扩增那么长的片段怎么测序呢

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-06-03 17:09:13
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王冠傑

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以测个序试试呗
8楼2015-06-03 17:19:46
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-03 10:21:30
要不然是模板不存,要不就是非特异性扩增,还有就是形成了二聚体。

你见过二聚体有5K这么大的情况么。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-06-04 16:26:46
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