| 查看: 5931 | 回复: 12 | |||
[求助]
荧光定量PCR的模板浓度
|
|||
| 本人第一次做荧光定量PCR，得到的CT值不是很理想，查阅得CT值在18-22之间比较理想，想问一下，同一批实验，加看家基因的反应液中和加目的基因的反应液中的模板浓度可以不同么，以获得理想的CT值？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生物 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有136人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Taqman实时荧光定量PCR本地信号过强是什么原因？
已经有7人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 标准菌株建立荧光定量PCR的标准曲线
已经有5人回复
- 荧光定量PCR中模板采用直接提取的DNA与构建目标片段质粒模板有什么区别？
已经有6人回复
- 相对定量PCR 基线
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR能不能对多个模板同时进行定量
已经有5人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR标准品制备及拷贝数计算
已经有3人回复
- 求助交流 荧光定量PCR基线偏下
已经有5人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（二）
已经有12人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
7楼2012-03-29 16:44:19
孙启亮
金虫 (著名写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 121 (高中生)
- 贵宾: 0.216
- 金币: 2881.3
- 散金: 2546
- 红花: 23
- 沙发: 19
- 帖子: 2792
- 在线: 677.4小时
- 虫号: 1112263
- 注册: 2010-10-01
- 性别: GG
- 专业: 前寒武纪地质学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 欢迎常来~ 2012-03-28 18:41:14
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 欢迎常来~ 2012-03-28 18:41:14
|
首先 模板量必须加等量的，这样内参才能对目的基因相对定量啊。其次 正常的Ct值范围为18-30之间，最好为23左右。一般一个20ul的反应体系里模板量最大为1ug。 其次，不知楼主的Ct值是太高还是太低，若是太高，那么说明模板浓度太低，这样楼主可以在提RNA的时候调整RNA浓度；若是太低，说明模板浓度过高，楼主可以适当降低模板浓度。若是Ct值太低的话，楼主还可以做个浓度梯度，这样既可以得到引物扩增效率又可以得到在最佳Ct值下的模板浓度。这样就对自己的实验做到了心里有数，在以后的实验中也会事半功倍 |
5楼2012-03-28 18:25:49
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
2楼2012-03-28 09:30:10
3楼2012-03-28 10:20:13
4楼2012-03-28 16:09:55
6楼2012-03-29 15:50:11
8楼2012-03-30 13:29:37
孙启亮
金虫 (著名写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 121 (高中生)
- 贵宾: 0.216
- 金币: 2881.3
- 散金: 2546
- 红花: 23
- 沙发: 19
- 帖子: 2792
- 在线: 677.4小时
- 虫号: 1112263
- 注册: 2010-10-01
- 性别: GG
- 专业: 前寒武纪地质学
9楼2012-03-30 15:03:08
10楼2012-03-31 12:34:06
20