应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 相对定量PCR求助
171/2返回列表12下一页
查看: 2358  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

物质鉴定

金虫 (正式写手)

[求助] 相对定量PCR求助 已有2人参与

本人刚接触分子，想请教各位牛人有关实时定量荧光PCR的一些问题。我要做不同土壤位点某类微生物的相对量的多少，所以想做相对定量PCR，初步的实验思路如下：
1提取各位点土壤中的DNA。
2实时荧光PCR。将某位点的DNA连续稀释7个10倍梯度，设定DNA的终拷贝数分别为100-10-7n/ul，用来做相对定量的标曲
3.已知这类微生物的特征基因A,用A基因扩增引物扩增上步中不同稀释倍数DNA中的A基因及其他位点样品的A基因。设定阈值，通过Ct值计算出各位点中A基因模板的相对拷贝数，从而得出各位点某类微生物的相对多少
不知道我的想法是不是对的？请各位指教，我会虚心接受大家的意见。另外我看好多有要管家基因，我这里需要管家基因嘛？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-01 13:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

于清
2楼2011-10-01 15:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

物质鉴定(金币+5): 2011-10-04 13:03:55
楼主想用的是什么方法，相对定量还是绝对定量，
相对定量的话看家基因是一定要的，楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度，即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因，需要做标准曲线，通过标准曲线来定量，但是标准品难以获得，自己做的不一定符合要求，所以一般不采用这种方法。
一点浅见，希望对你有用。
赞一下 回复此楼
风雪夜归人
3楼2011-10-02 19:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你做微生物含量的多少，完全可以用DGGE啊，RT-PCR主要是看基因表达量的差异的，例如不同处理条件下，二者的表达量差异
赞一下 回复此楼
4楼2011-10-03 10:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

物质鉴定

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-10-02 19:26:54:
楼主想用的是什么方法，相对定量还是绝对定量，
相对定量的话看家基因是一定要的，楼主的第二部的母的就是筛选最适模板浓度，即pcr效率较为接近100%
绝对定量不需要看家基因，需要做标准曲线，通过标准曲线来定 ...

作微生物的话用什么看家基因好列，能给点意见吗？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2011-10-04 12:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

物质鉴定

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinongfish at 2011-10-03 10:29:36:
你做微生物含量的多少，完全可以用DGGE啊，RT-PCR主要是看基因表达量的差异的，例如不同处理条件下，二者的表达量差异

老板说DGGE已经过时了，所以不要我做，呵呵
赞一下 回复此楼
6楼2011-10-04 13:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingqi

木虫 (小有名气)
你是想知道那种微生物的多少啊，细菌？真菌？
是要土壤中总的微生物量的多少，还是土壤中某种微生物占的比比例的多少？
赞一下 回复此楼
7楼2011-10-04 14:09:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinongfish

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 物质鉴定 at 2011-10-04 12:57:15:
作微生物的话用什么看家基因好列，能给点意见吗？谢谢

是不是啊，我还打算做呢 O(∩_∩)O~
赞一下 回复此楼
8楼2011-10-04 23:12:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

默默的等待

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我感觉你用探针做是不是好一点啊 自己觉得，不知道对不对
赞一下 回复此楼
9楼2011-10-05 21:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiajiao1012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2143191楼: Originally posted by 物质鉴定 at 2011-10-04 12:57:15
作微生物的话用什么看家基因好列，能给点意见吗？谢谢...

你现在应该已经确定方法做了吧。我也想请教一下呢，我是做混合菌种某种微生物的计数，想请你分享下经验，不胜感激~~
赞一下 回复此楼
just be happy
10楼2012-11-01 09:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 物质鉴定 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料化工调剂 +9 今夏不夏 2026-03-01 10/500 2026-03-01 16:01 by hmn_wj
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭