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chendarid0

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[交流] 【求助/交流】RT-real time pcr问题已有2人参与

我是新手请高手不吝赐教
我是做β微管蛋白基因的相对基因表达差异，以β-ACTIN为内参基因，在前面的RT-PCR中我得到的rna是否可以不用电泳鉴定就直接可以用于后面的cDNA转录，因为电泳槽经常跑DNA，我担心rna鉴定时被降解
在荧光定量pcr之前我要用得到的cDNA分别以β微管蛋白基因引物和β-ACTIN内参基因引物来进行pcr扩增，以检测cDNA是否搞出来了，如果我摸索出了他们的较佳的pcr反应条件那我以后是否就可以省略这步直接在荧光定量pcr上来进行相对定量pcr检测
谢谢

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三人行必有我师

1楼 2010-08-23 14:51:10

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mafang68

金虫 (著名写手)

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amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-08-23 20:58:47

RNA降解是因为RNA酶的存在，跟你的电泳槽跑DNA无关。
你检测CDNA时只跑actin即可；摸索出RT-PCTR条件后，可直接省略此步骤。
其实，你验证的仅是你逆转的CDNA质量如何。

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木虫啦，哈哈

2楼2010-08-23 15:09:31

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chendarid0

银虫 (初入文坛)

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Originally posted by mafang68 at 2010-08-23 15:09:31:
RNA降解是因为RNA酶的存在，跟你的电泳槽跑DNA无关。
你检测CDNA时只跑actin即可；摸索出RT-PCTR条件后，可直接省略此步骤。
其实，你验证的仅是你逆转的CDNA质量如何。

谢这位高手。你的意思是必须进行rna电泳鉴定。那我进行rna电泳鉴定时电泳槽可以不用DEPC水洗，可以不用新胶和新缓冲液吗？我看到好像有人用甲醛的凝胶电泳，而且电泳槽还要用酸还是碱洗（我好像有点忘了），过氧水洗，还得高温烘干，好像太费事了

摸索出rt-pcr条件后我省略此步普通pcr那我的cDNA怎么保证质量可以呢
谢谢

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三人行必有我师

3楼2010-08-23 15:35:05

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