24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2136  |  回复: 6

chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】RT-real time pcr问题 已有2人参与

我是新手 请高手不吝赐教
我是做β微管蛋白基因的相对基因表达差异,以β-ACTIN为内参基因,在前面的RT-PCR中我得到的rna是否可以不用电泳鉴定就直接可以用于后面的cDNA转录,因为电泳槽经常跑DNA,我担心rna鉴定时被降解
在荧光定量pcr之前我要用得到的cDNA分别以β微管蛋白基因引物和β-ACTIN内参基因引物来进行pcr扩增,以检测cDNA是否搞出来了,如果我摸索出了他们的较佳的pcr反应条件那我以后是否就可以省略这步直接在荧光定量pcr上来进行相对定量pcr检测  
谢谢
回复此楼
三人行必有我师
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-08-23 20:58:47
RNA降解是因为RNA酶的存在,跟你的电泳槽跑DNA无关。
你检测CDNA时只跑actin即可;  摸索出RT-PCTR条件后,可直接省略此步骤。
其实,你验证的仅是你逆转的CDNA质量如何。
木虫啦,哈哈
2楼2010-08-23 15:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-23 15:09:31:
RNA降解是因为RNA酶的存在,跟你的电泳槽跑DNA无关。
你检测CDNA时只跑actin即可;  摸索出RT-PCTR条件后,可直接省略此步骤。
其实,你验证的仅是你逆转的CDNA质量如何。

谢这位高手。你的意思是必须进行rna电泳鉴定。那我进行rna电泳鉴定时电泳槽可以不用DEPC水洗,可以不用新胶和新缓冲液吗?我看到好像有人用甲醛的凝胶电泳,而且电泳槽还要用酸还是碱洗(我好像有点忘了),过氧水洗,还得高温烘干,好像太费事了

摸索出rt-pcr条件后我省略此步普通pcr那我的cDNA怎么保证质量可以呢
谢谢
三人行必有我师
3楼2010-08-23 15:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):热心 2010-08-24 09:19:25
呵呵,你理解错了,我的意思是不用进行RNA鉴定。我们提的次数多了,直接逆转CDNA后跑RT-PCR。就看你提RNA的水平能不能过关了
木虫啦,哈哈
4楼2010-08-23 20:43:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-23 20:43:30:
呵呵,你理解错了,我的意思是不用进行RNA鉴定。我们提的次数多了,直接逆转CDNA后跑RT-PCR。就看你提RNA的水平能不能过关了

谢谢你的指点,你的意思是rna电泳鉴定可以省略,但是得到的每个cDNA都要以actin引物来进行普通pcr鉴定,没有问题再进行荧光定量pcr
三人行必有我师
5楼2010-08-24 08:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-25 09:44:16
呵呵,也不是。只要你能确保你提的RNA质量好,不必用普通PCR来验证,直接跑RT-PCR即可。所以,你需要的就是多联系RNA提取技术
木虫啦,哈哈
6楼2010-08-24 20:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-24 20:50:39:
呵呵,也不是。只要你能确保你提的RNA质量好,不必用普通PCR来验证,直接跑RT-PCR即可。所以,你需要的就是多联系RNA提取技术

谢谢你的指点
三人行必有我师
7楼2010-08-25 08:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chendarid0 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-07 8/400 2026-04-09 08:55 by 科研毛毛虫化蝶
[考研] 0860004 求调剂 309分 +5 Yin DY 2026-04-09 5/250 2026-04-09 08:54 by dick_runner
[考研] 293调剂 +21 yj1221 2026-04-08 22/1100 2026-04-09 08:34 by 5268321
[基金申请] 有爆料,一个青年教师卖房得400万,然后换了一个四青帽子 +6 babu2015 2026-04-08 6/300 2026-04-09 08:14 by kudofaye
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +5 bradoner 2026-04-08 6/300 2026-04-09 08:04 by Sammy2
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 调剂 +18 不逢春 2026-04-05 19/950 2026-04-07 22:04 by lijunpoly
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-07 11/550 2026-04-07 15:13 by shdgaomin
[考研] 085100建筑学 寻求跨专业调剂 一志愿南大294分 校级省级国家级奖项若干 踏实肯干 +3 1021075758 2026-04-06 4/200 2026-04-07 09:23 by 蓝云思雨
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +4 江淮北月 2026-04-05 4/200 2026-04-06 22:44 by chenzhimin
[考研] 一志愿南航,数一英一学硕317求调剂!! +6 Acaciad 2026-04-04 6/300 2026-04-06 12:13 by 考研学校招点人
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 387求调剂 +4 爱吃片豆土 2026-04-03 5/250 2026-04-04 08:10 by 岸上的一条鱼
[考研] 化工求调剂 +11 荔香芝士椰奶 2026-04-03 11/550 2026-04-03 22:06 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 11408,284分,二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 专硕085601求调剂 +7 suyifei 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:00 by 欣喜777
[考研] 313求调剂 +3 ~微微凉~ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 372分材料与化工(085600)一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 一志愿大工学硕,求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
信息提示
请填处理意见