| 查看: 2218 | 回复: 18 | ||
wkl1984金虫 (小有名气)
|
[求助]
ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
|
做反转录，按照生工的AMV一步反转录试剂盒的具体内容操作，但是试剂盒不建议用随机六聚体引物扩增，我正好用随机六聚体引物扩增了，扩增的结果如下，1为1000kb的marker，2 为ＲＴ－ＰＣＲ产物，marker好像有问题。扩增条件为 预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。另外，模板ＤＮＡ的量加了3微升，总模板DNA小余1微克。其余按照试剂盒操作。特异性差一点，请大家给出建议 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有268人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
已经有8人回复
- 【求助/交流】RT-PCR羊3K基因
已经有6人回复
- 【求助/交流】做过RT-PCR的请进
已经有12人回复
- 关于SYBR半定量荧光定量PCR的问题求助
已经有2人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
已经有10人回复
- 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助
已经有17人回复
- 【求助/交流】RT-real time pcr问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】RT-PCR不成功
已经有25人回复
- 【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带
已经有12人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
2楼2011-05-01 09:04:15
wkl1984
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 806.3
- 散金: 4
- 帖子: 240
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 912480
- 注册: 2009-11-25
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2011-05-01 09:09:51
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
4楼2011-05-01 09:44:33
wkl1984
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 806.3
- 散金: 4
- 帖子: 240
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 912480
- 注册: 2009-11-25
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2011-05-01 10:46:42
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
6楼2011-05-01 20:35:01
wkl1984
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 806.3
- 散金: 4
- 帖子: 240
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 912480
- 注册: 2009-11-25
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
7楼2011-05-02 16:31:56
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
8楼2011-05-02 20:59:06
9楼2011-05-03 10:28:59
wkl1984
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 806.3
- 散金: 4
- 帖子: 240
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 912480
- 注册: 2009-11-25
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-06 08:45:06
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-06 08:45:06
|
扩增条件为 预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。反应体系为ddH2o 19微升，2×RT-PCR Buffer 25微升，AMV Rt/taq Mix 1微升，随机六聚体引物 2微升，模板DNA 3微升，总体积 50微升。引物为随机六聚体引物，购买于Takara，配置浓度为0.2微摩尔每升。预测得到的PCR的序列长度为400-500bp，具体的序列我没有找到，只是按照构建svFv的操作手册和参考文献进行，可是为什么文献上都不给出CDNA的结果？仅给出了通过cDNA扩增出VH和VL的片段，其中VH和VL的片段大约为350bp,VH的片段为397bp,VL的片段为330bp.并且资料提供说按照cDNA合成试剂盒操作。 |
10楼2011-05-04 10:06:25
