24小时热门版块排行榜    

查看: 1499  |  回复: 25
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 linxi8579 的 1 个金币

linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RT-PCR不成功已有12人参与

最近想做真菌里一个基因的异源表达,可是反转出来的CDNA老是扩不出带来,DNA为模板的能够扩出来。但是用tublin(100多bp)引物扩CDNA能扩出来。我的目的基因大小在3000多bp,高手指点一下吧!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)

★ ★
scelab(金币+2):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-08-02 22:49:03
linxi8579(金币+2): 2010-08-03 10:31:46
RNA浓度的问题,可能RNA浓度低 ,你用什么方法提的RNA 啊,最后用多少水溶啊,沉淀多吗?
2楼2010-08-02 21:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-03 10:31:54
你是要扩完整的阅读框吗?
3楼2010-08-02 22:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:53:15
linxi8579(金币+1): 2010-08-03 10:34:55
恩  建议你上传一下你提的RNA让大家看看!
理论上从cDNA上要比从基因组中好扩增的啊!
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-08-03 00:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:11:01:
RNA浓度的问题,可能RNA浓度低 ,你用什么方法提的RNA 啊,最后用多少水溶啊,沉淀多吗?

我是用invitrogen的trizol提的,用TAKARA的DNA酶I消化,然后用trizol再提一遍。不过确实我的RNA浓度很低,以前都是2000多ug/ml,这次才600多。但是我反转加了3ul呢,用天根的MLV反的。我在想除了RNA浓度低,是不是我用trizol提的第二遍有些有机分子影响了反转啊。
5楼2010-08-03 10:29:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-08-02 22:24:12:
你是要扩完整的阅读框吗?

是的,我要做异源表达的。所以从起始扩到终止密码子呢。
6楼2010-08-03 10:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-08-03 00:34:38:
恩  建议你上传一下你提的RNA让大家看看!
理论上从cDNA上要比从基因组中好扩增的啊!

我还不太会在这上面传图,嘿嘿。不过我的胶图因为我测的RNA浓度600多ug/ml,有点低所以我加了2.5ul上样,结果有点过了。但是5S带还有,我看还行吧。
7楼2010-08-03 10:34:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ymzfeng

金虫 (小有名气)

以cDNA为模板进行扩增
还要优化你的反应体系和反应条件
循环数是否适宜
8楼2010-08-03 10:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huking

铁虫 (小有名气)

退火温度设一个梯度,模板也可以设置一梯度,另外延伸时间设置长一些,看你的片段挺大的。
9楼2010-08-03 10:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kimxu_nt

木虫 (著名写手)

1000bp以上做PCR不仅困难,错配几率也增加了啊
10楼2010-08-03 11:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 南京大学金融科技研究中心诚招会计审计财务分析方面的顾问专家(可远程兼职) +4 cowhorce 2024-12-23 4/200 2024-12-23 21:01 by 47z@e1gq
[教师之家] 咨询一下,是不是教授之间比较忌讳谈论文造假,因为可能很多人都是造假 +9 akslis2024 2024-12-21 10/500 2024-12-23 20:46 by zeolitess
[微米和纳米] 【怎么确定一种物质呀】xrd测不出峰的材料 50+3 小裴想上学 2024-12-21 6/300 2024-12-23 20:44 by zeolitess
[论文投稿] 挑数据是造假吗 +10 电话的建设 2024-12-21 10/500 2024-12-23 18:53 by longwen8
[硕博家园] 有未就业的博士吗? +11 大发财树 2024-12-22 12/600 2024-12-23 17:21 by Zoeyhsyk
[论文投稿] MDPI投稿连续拒稿是什么原因?文章质量不好吗?还是其他原因? 2+9 多听多看多学 2024-12-17 19/950 2024-12-23 17:12 by maolC
[职场人生] 网络游戏有意义吗 +4 神明.斯派克. 2024-12-16 4/200 2024-12-23 15:15 by 开心就好56
[教师之家] 为啥很多高校老师不愿意当副院长? +12 意得辑_editage 2024-12-18 16/800 2024-12-23 11:29 by jurkat.1640
[基金申请] 网传董晨院士涉嫌24篇论文造假,本人回应:非恶意造假 +7 babu2015 2024-12-17 7/350 2024-12-23 10:25 by 老钱秀
[找工作] 水电解制氢方向求职 +6 kyle1999 2024-12-19 13/650 2024-12-23 10:02 by kyle1999
[硕博家园] 柔性引进硕博人才 +7 大发财树 2024-12-20 7/350 2024-12-23 02:32 by upceric
[论文投稿] 投稿意见求助,没弄清回答的方向 8+4 moonlig 2024-12-18 4/200 2024-12-22 08:51 by steven_198377
[论文投稿] 投稿期刊 5+4 王丽媛西西西 2024-12-17 7/350 2024-12-22 04:44 by yudaoqian88
[考研] 26考研 +8 青云要冲沪深 2024-12-21 8/400 2024-12-22 00:28 by 4zu@6h00
[教师之家] 今年的科研绩效只奖励Q1了 +12 holypower 2024-12-20 17/850 2024-12-21 16:13 by willbuilder
[有机交流] 工艺需求,付费 +4 想当然灬 2024-12-17 6/300 2024-12-21 06:23 by a893069456
[论文投稿] 论文校稿 50+5 whale_full 2024-12-17 10/500 2024-12-20 16:39 by 北京莱茵润色
[论文投稿] 投稿投错期刊,怎么撤稿? 200+4 birrd 2024-12-17 8/400 2024-12-20 14:53 by yiran909
[论文投稿] 毕业论文疑虑 20+6 风吹荷叶煞 2024-12-17 17/850 2024-12-18 17:35 by holypower
[论文投稿] 申博 +3 翟某人 2024-12-16 3/150 2024-12-17 09:24 by xs74101122
信息提示
请填处理意见