应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RT-PCR不成功
262/3返回列表上一页123下一页
查看: 1766  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shuiyue2728

新虫 (正式写手)
linxi8579(金币+1): 2010-08-03 14:14:58
RNA电泳图怎么样
建议缩短扩增片段
优化条件
赞一下 回复此楼
11楼2010-08-03 13:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-03 13:12:22:
RNA电泳图怎么样
建议缩短扩增片段
优化条件

但是我的目的是做异源表达啊，是要扩全长的啊。
赞一下 回复此楼
12楼2010-08-03 14:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)
linxi8579(金币+1): 2010-08-03 14:39:12
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 14:21:47:

但是我的目的是做异源表达啊，是要扩全长的啊。

但是你扩不出来啊，这种不好扩的，先短的，再做race,这只是方法
赞一下 回复此楼
13楼2010-08-03 14:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-03 14:27:55:

但是你扩不出来啊，这种不好扩的，先短的，再做race,这只是方法

恩，这是个好方法。但是还有一个不幸的消息，我短的也没扩出来啊，太痛苦了。
赞一下 回复此楼
14楼2010-08-03 14:38:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 14:38:58:

恩，这是个好方法。但是还有一个不幸的消息，我短的也没扩出来啊，太痛苦了。

你的这个是已知序列吧，设计引物最好多个软件并用，使得引物本身特异性和条件最优
赞一下 回复此楼
15楼2010-08-03 14:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
这个没办法，优化pcr条件吧，3k不算太长，我们用pfu都能p出来
赞一下 回复此楼
16楼2010-08-03 15:17:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 10:29:49:

我是用invitrogen的trizol提的，用TAKARA的DNA酶I消化，然后用trizol再提一遍。不过确实我的RNA浓度很低，以前都是2000多ug/ml，这次才600多。但是我反转加了3ul呢，用天根的MLV反的。我在想除了RNA浓度低，是不 ...

天根的效果不好 我们都用宝生物的。
赞一下 回复此楼
17楼2010-08-03 18:50:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-03 14:56:50:

你的这个是已知序列吧，设计引物最好多个软件并用，使得引物本身特异性和条件最优

但是我用DNA可以扩出来啊，也许引物和PCR体系应该没有问题吧。
赞一下 回复此楼
18楼2010-08-04 11:40:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-03 15:17:55:
这个没办法，优化pcr条件吧，3k不算太长，我们用pfu都能p出来

你认为这是PCR条件的问题吗？可是我的tublin能够扩出来啊。我今天又提了一次RNA，浓度应该是挺高了，再试一下吧。
赞一下 回复此楼
19楼2010-08-04 11:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)
linxi8579(金币+1): 2010-08-07 20:14:52
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-04 11:40:19:

但是我用DNA可以扩出来啊，也许引物和PCR体系应该没有问题吧。

cDNA里这个基因的富集度不高，引物特异性体系和条件是很重要的
赞一下 回复此楼
20楼2010-08-04 17:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
262/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭