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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-03 14:14:58
RNA电泳图怎么样
建议缩短扩增片段
优化条件
11楼2010-08-03 13:12:22
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

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Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-03 13:12:22:
RNA电泳图怎么样
建议缩短扩增片段
优化条件

但是我的目的是做异源表达啊,是要扩全长的啊。
12楼2010-08-03 14:21:47
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-03 14:39:12
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Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 14:21:47:

但是我的目的是做异源表达啊,是要扩全长的啊。

但是你扩不出来啊,这种不好扩的,先短的,再做race,这只是方法
13楼2010-08-03 14:27:55
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

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Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-03 14:27:55:

但是你扩不出来啊,这种不好扩的,先短的,再做race,这只是方法

恩,这是个好方法。但是还有一个不幸的消息,我短的也没扩出来啊,太痛苦了。
14楼2010-08-03 14:38:58
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

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Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 14:38:58:

恩,这是个好方法。但是还有一个不幸的消息,我短的也没扩出来啊,太痛苦了。

你的这个是已知序列吧,设计引物最好多个软件并用,使得引物本身特异性和条件最优
15楼2010-08-03 14:56:50
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silicare

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合伙创业版兼职版主

优秀版主

这个没办法,优化pcr条件吧,3k不算太长,我们用pfu都能p出来
16楼2010-08-03 15:17:55
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louli

铜虫 (小有名气)

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Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 10:29:49:

我是用invitrogen的trizol提的,用TAKARA的DNA酶I消化,然后用trizol再提一遍。不过确实我的RNA浓度很低,以前都是2000多ug/ml,这次才600多。但是我反转加了3ul呢,用天根的MLV反的。我在想除了RNA浓度低,是不 ...

天根的效果不好 我们都用宝生物的。
17楼2010-08-03 18:50:08
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

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Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-03 14:56:50:

你的这个是已知序列吧,设计引物最好多个软件并用,使得引物本身特异性和条件最优

但是我用DNA可以扩出来啊,也许引物和PCR体系应该没有问题吧。
18楼2010-08-04 11:40:19
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

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Originally posted by silicare at 2010-08-03 15:17:55:
这个没办法,优化pcr条件吧,3k不算太长,我们用pfu都能p出来

你认为这是PCR条件的问题吗?可是我的tublin能够扩出来啊。我今天又提了一次RNA,浓度应该是挺高了,再试一下吧。
19楼2010-08-04 11:44:02
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-07 20:14:52
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Originally posted by linxi8579 at 2010-08-04 11:40:19:

但是我用DNA可以扩出来啊,也许引物和PCR体系应该没有问题吧。

cDNA里这个基因的富集度不高,引物特异性体系和条件是很重要的
20楼2010-08-04 17:03:51
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