24小时热门版块排行榜    

查看: 1785  |  回复: 25
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RT-PCR不成功 已有12人参与

最近想做真菌里一个基因的异源表达,可是反转出来的CDNA老是扩不出带来,DNA为模板的能够扩出来。但是用tublin(100多bp)引物扩CDNA能扩出来。我的目的基因大小在3000多bp,高手指点一下吧!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-03 14:14:58
RNA电泳图怎么样
建议缩短扩增片段
优化条件
11楼2010-08-03 13:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-03 14:39:12
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 14:21:47:

但是我的目的是做异源表达啊,是要扩全长的啊。

但是你扩不出来啊,这种不好扩的,先短的,再做race,这只是方法
13楼2010-08-03 14:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-03 14:38:58:

恩,这是个好方法。但是还有一个不幸的消息,我短的也没扩出来啊,太痛苦了。

你的这个是已知序列吧,设计引物最好多个软件并用,使得引物本身特异性和条件最优
15楼2010-08-03 14:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

linxi8579(金币+1): 2010-08-07 20:14:52
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-04 11:40:19:

但是我用DNA可以扩出来啊,也许引物和PCR体系应该没有问题吧。

cDNA里这个基因的富集度不高,引物特异性体系和条件是很重要的
20楼2010-08-04 17:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-07 20:12:21:

请问您有什么好的建议吗?

引物就是之前说过的,提高所提取RNA的质量
25楼2010-08-10 13:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见