应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！
61/1返回列表
查看: 2048  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

suzz0901

新虫 (初入文坛)

[求助] 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！

从流感病毒感染的MDCK细胞中提取RNA，反转录cDNA后进行PCR扩增，跑电泳分析条带。目地序列为229bp.开始4月份条带很明显清晰，后来6月份重提时，怎么也出不来目的条带，不是非特异扩增就是弥散，改变了温度52，54，56，58，及酶等用量均无法出来目的条带。万分纠结，还望高人指点~~~
附图，第一张是原来4月较好结果，后面为最近电泳图(后面较清晰条带为GADPH）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-31 10:54:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longlikun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 12:03:36
suzz0901(金币+1): 谢谢，回复的好快！！ 2011-08-31 15:00:31
最可能的是提取的RNA质量的问题，也有可能是反转录效率的2次有较大差别。最好用上次的cDNA做，如果需重新提取，请注意RNA提取的条件和试剂容器的处理。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-31 12:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qinchunhong

铁虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-09-29 17:21:39
感觉你的第四块胶块好像都没有4月份的亮，会不会是EB或者Glodview的添加不对啊
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-09-29 12:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackbee

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-09-30 10:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jocelyn2012

新虫 (初入文坛)
确定是同一批样品，不是变异的？话说我之前做RT也是这样，第一次很容易就P出来了，后来就一直不出结果。纠结几个月后发现第二批样品是诱变过的
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-29 14:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞雪迷影

金虫 (正式写手)
提RNA时温度也是个问题，温度高也会使RNA自身发生降解，6月份比四月份室温高，这可能也是关键，楼主操作时一定要保证在冰盒上进行，保证低温
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-10 09:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 suzz0901 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭