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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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suzz0901

新虫 (初入文坛)

[求助] 流感病毒RT-PCR,电泳老是跑不出条带~~~纠结!

从流感病毒感染的MDCK细胞中提取RNA,反转录cDNA后进行PCR扩增,跑电泳分析条带。目地序列为229bp.开始4月份条带很明显清晰,后来6月份重提时,怎么也出不来目的条带,不是非特异扩增就是弥散,改变了温度52,54,56,58,及酶等用量均无法出来目的条带。万分纠结,还望高人指点~~~
附图,第一张是原来4月较好结果,后面为最近电泳图(后面较清晰条带为GADPH)






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longlikun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 12:03:36
suzz0901(金币+1): 谢谢,回复的好快!! 2011-08-31 15:00:31
最可能的是提取的RNA质量的问题,也有可能是反转录效率的2次有较大差别。最好用上次的cDNA做,如果需重新提取,请注意RNA提取的条件和试剂容器的处理。
2楼2011-08-31 12:02:39
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qinchunhong

铁虫 (小有名气)

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-09-29 17:21:39
感觉你的第四块胶块好像都没有4月份的亮,会不会是EB或者Glodview的添加不对啊
3楼2011-09-29 12:53:55
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blackbee

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2011-09-30 10:54:32
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jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

确定是同一批样品,不是变异的?话说我之前做RT也是这样,第一次很容易就P出来了,后来就一直不出结果。纠结几个月后发现第二批样品是诱变过的
5楼2012-04-29 14:53:46
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飞雪迷影

金虫 (正式写手)

提RNA时温度也是个问题,温度高也会使RNA自身发生降解,6月份比四月份室温高,这可能也是关键,楼主操作时一定要保证在冰盒上进行,保证低温
6楼2012-07-10 09:04:07
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