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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！
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suzz0901

新虫 (初入文坛)

[求助] 流感病毒RT-PCR，电泳老是跑不出条带~~~纠结！

从流感病毒感染的MDCK细胞中提取RNA，反转录cDNA后进行PCR扩增，跑电泳分析条带。目地序列为229bp.开始4月份条带很明显清晰，后来6月份重提时，怎么也出不来目的条带，不是非特异扩增就是弥散，改变了温度52，54，56，58，及酶等用量均无法出来目的条带。万分纠结，还望高人指点~~~
附图，第一张是原来4月较好结果，后面为最近电泳图(后面较清晰条带为GADPH）
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1楼 2011-08-31 10:54:45
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longlikun

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 12:03:36
suzz0901(金币+1): 谢谢，回复的好快！！ 2011-08-31 15:00:31
最可能的是提取的RNA质量的问题，也有可能是反转录效率的2次有较大差别。最好用上次的cDNA做，如果需重新提取，请注意RNA提取的条件和试剂容器的处理。
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2楼2011-08-31 12:02:39
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qinchunhong

铁虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-09-29 17:21:39
感觉你的第四块胶块好像都没有4月份的亮，会不会是EB或者Glodview的添加不对啊
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3楼2011-09-29 12:53:55
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blackbee

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-09-30 10:54:32
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jocelyn2012

新虫 (初入文坛)
确定是同一批样品，不是变异的？话说我之前做RT也是这样，第一次很容易就P出来了，后来就一直不出结果。纠结几个月后发现第二批样品是诱变过的
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5楼2012-04-29 14:53:46
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飞雪迷影

金虫 (正式写手)
提RNA时温度也是个问题，温度高也会使RNA自身发生降解，6月份比四月份室温高，这可能也是关键，楼主操作时一定要保证在冰盒上进行，保证低温
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6楼2012-07-10 09:04:07
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