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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 新手求助——质粒电泳条带问题

电泳图谱解释:第一泳道为1Kb DNA ladder marker,后面四个为pUC19,最后五个为一个9000bp的质粒,请问pUC19为什么会出现多个条带,我看过相关的资料,觉得第一个应该是超螺旋,后面的一个是开环的,那后面的应该是什么?我想做酶切连接,请问会不会有什么不利影响?为什么9000bp的那个质粒为什么不会出现这种情况啊?电泳条件:上样5uL,电压100V,时间40min,1%琼脂糖。请多多赐教~~~

电泳图谱

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 11:59 ]
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panda73

金虫 (小有名气)

无图无真相
2楼2011-12-20 21:45:54
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guangxidaxue

金虫 (小有名气)

无图无真相!但是大肠杆菌提取的质粒三条带是很正常,基本不会影响实验的
3楼2011-12-20 22:33:19
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+2): ★★★很有帮助 确实是,我酶切后就只有一个条带了~~~ 2011-12-21 18:39:04
没有单酶切去跑质粒说明不了问题。
4楼2011-12-20 22:34:50
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shaquila

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1): 暴力 哈哈 2011-12-20 23:53:32
其实提质粒没啥好说,只要不要太暴力,两三条带很正常,超螺旋是大部份,不会影响后续步骤
5楼2011-12-20 22:56:09
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 质粒没有酶切,谢谢~~ 2011-12-21 18:37:21
继续往下做,应该没问题的。你那个9带的质粒我看Marker怎么在6kb的位置呢?
6楼2011-12-21 11:43:16
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coh2lxx

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+2): ★★★很有帮助 恩,谢谢 2011-12-21 18:37:59
应该没问题,质粒有多条带也正常,我也曾遇到过。
7楼2011-12-21 12:02:04
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+3): ★★★很有帮助 确实不影响酶切,谢谢~~ 2011-12-21 18:33:56
一般提取质粒后电泳验证都会出现3条带,即线型,环状,双螺旋,这个与你提取质粒时,菌体处于哪个生长时期,以及提取过程中的一些操作有关系。基本上不会影响后续的酶切和连接
8楼2011-12-21 15:02:24
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): 有帮助 谢谢帮助~~~ 2011-12-22 16:54:18
质粒有三种构型,根据提取质粒的质量的好坏,可能在跑胶过程虫出现不同的条带,这个很正常,没什么可担心的。你出现不同的条带有可能就是你质粒有好有坏的结果。
我不管你看起看不起我,我都是个演员
9楼2011-12-22 09:33:39
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-21 11:43:16:
继续往下做,应该没问题的。你那个9带的质粒我看Marker怎么在6kb的位置呢?

质粒为环状,Marker为线性DNA(跑得慢一些),跑的位置有差异。
伟大航线....
10楼2011-12-22 09:49:05
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