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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 新手求助——质粒电泳条带问题
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[求助] 新手求助——质粒电泳条带问题

电泳图谱解释：第一泳道为1Kb DNA ladder marker，后面四个为pUC19，最后五个为一个9000bp的质粒，请问pUC19为什么会出现多个条带，我看过相关的资料，觉得第一个应该是超螺旋，后面的一个是开环的，那后面的应该是什么？我想做酶切连接，请问会不会有什么不利影响？为什么9000bp的那个质粒为什么不会出现这种情况啊？电泳条件：上样5uL，电压100V，时间40min，1%琼脂糖。请多多赐教~~~

电泳图谱

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 11:59 ]
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1楼 2011-12-20 16:48:16
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panda73

金虫 (小有名气)
无图无真相
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2楼2011-12-20 21:45:54
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guangxidaxue

金虫 (小有名气)
无图无真相！但是大肠杆菌提取的质粒三条带是很正常，基本不会影响实验的
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3楼2011-12-20 22:33:19
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+2): ★★★很有帮助 确实是，我酶切后就只有一个条带了~~~ 2011-12-21 18:39:04
没有单酶切去跑质粒说明不了问题。
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4楼2011-12-20 22:34:50
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 暴力 哈哈 2011-12-20 23:53:32
其实提质粒没啥好说，只要不要太暴力，两三条带很正常，超螺旋是大部份，不会影响后续步骤
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5楼2011-12-20 22:56:09
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 质粒没有酶切，谢谢~~ 2011-12-21 18:37:21
继续往下做，应该没问题的。你那个9带的质粒我看Marker怎么在6kb的位置呢？
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6楼2011-12-21 11:43:16
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coh2lxx

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+2): ★★★很有帮助 恩，谢谢 2011-12-21 18:37:59
应该没问题，质粒有多条带也正常，我也曾遇到过。
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7楼2011-12-21 12:02:04
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+3): ★★★很有帮助 确实不影响酶切，谢谢~~ 2011-12-21 18:33:56
一般提取质粒后电泳验证都会出现3条带，即线型，环状，双螺旋，这个与你提取质粒时，菌体处于哪个生长时期，以及提取过程中的一些操作有关系。基本上不会影响后续的酶切和连接
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8楼2011-12-21 15:02:24
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liuyu_sdili(金币+1): ★有帮助 谢谢帮助~~~ 2011-12-22 16:54:18
质粒有三种构型，根据提取质粒的质量的好坏，可能在跑胶过程虫出现不同的条带，这个很正常，没什么可担心的。你出现不同的条带有可能就是你质粒有好有坏的结果。
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
9楼2011-12-22 09:33:39
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 5xiaosh at 2011-12-21 11:43:16:
继续往下做，应该没问题的。你那个9带的质粒我看Marker怎么在6kb的位置呢？

质粒为环状，Marker为线性DNA（跑得慢一些），跑的位置有差异。
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伟大航线....
10楼2011-12-22 09:49:05
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