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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
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hslxiaoyao

新虫 (初入文坛)

[交流] 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？ 已有5人参与

各位大家好，我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？如果是的话，对酶有没有影响？是不是不能用了
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1楼 2011-07-21 20:56:16
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-07-23 11:22:54
质粒没有被酶切好不一定因为酶失活了，这只是其中一个原因而已，还有可能是
1、质粒本身提取得不干净，我有一个质粒，两批养菌提取的分别用来酶切，同样的条件，结果其中一批就是酶切得不够完全。
2、缓冲液没选对，有的酶附送的缓冲液包装的EP管上没有写明适用的酶，只写明了种类，可能没有阅读酶的说明书，选用了不是最合适的缓冲液。
3、酶切的温度和时间不合适等等。

内切酶最终还是要在室温或者37度（而不是-20度）下催化反应的，如果在外面暴露时间不长，应该不会那么脆弱。你的酶先别丢，看看上面的是不是都对了，再酶切一次，同时酶切一个容易酶切的质粒，比较一下效果就知道酶有没有失活了。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-22 07:37:43
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hslxiaoyao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 07:37:43:
质粒没有被酶切好不一定因为酶失活了，这只是其中一个原因而已，还有可能是
1、质粒本身提取得不干净，我有一个质粒，两批养菌提取的分别用来酶切，同样的条件，结果其中一批就是酶切得不够完全。
2、缓冲液没选 ...

恩，我试试看
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3楼2011-07-22 16:28:55
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likewind_z

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
说明情况太简洁了，怎么帮你分析呢？你说酶放外面是指冰上呢还是室温呢？放了多久呢？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-22 17:33:44
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-07-23 11:23:12
没有切开的原因很多，还包括：
1 质粒浓度过大
2 酶切时间过短
3 酶切温度不精确
4 酶切体系没有混匀
5 有的酶切体系需要加入BSA。
酶最好是放在-20℃冰箱，只是在加入酶的那个时候拿出来，然后尽快放回冰箱。
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5楼2011-07-23 08:21:18
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hslxiaoyao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by likewind_z at 2011-07-22 17:33:44:
说明情况太简洁了，怎么帮你分析呢？你说酶放外面是指冰上呢还是室温呢？放了多久呢？

没有放在冰上，要是放在冰上也不会那么担心啦。
大概有3分钟左右。
赞一下 回复此楼
6楼2011-07-24 14:43:07
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hslxiaoyao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-07-23 08:21:18:
没有切开的原因很多，还包括：
1 质粒浓度过大
2 酶切时间过短
3 酶切温度不精确
4 酶切体系没有混匀
5 有的酶切体系需要加入BSA。
酶最好是放在-20℃冰箱，只是在加入酶的那个时候拿出来，然后尽快放回冰 ...

恩
7楼2011-07-24 14:43:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
除了他们上面说的还有一点需要注意，查一下你用的酶是不是容易受到甲基化的影响，真要那样的话无论你怎么切都切不开的，这时候重新转一下JM108再提质粒酶切就OK了，祝你成功
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-07-24 15:22:59
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liangxiuyan

木虫 (职业作家)
一般就不太好使 了，你可以借别人的酶再试试就知道了
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每一段路途，都是为了成就一段梦想
9楼2011-07-24 17:17:48
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hslxiaoyao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-24 15:22:59:
除了他们上面说的还有一点需要注意，查一下你用的酶是不是容易受到甲基化的影响，真要那样的话无论你怎么切都切不开的，这时候重新转一下JM108再提质粒酶切就OK了，祝你成功

考虑下，谢了
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10楼2011-07-25 19:49:35
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