我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？ - 生物科学

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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-07-23 11:22:54

质粒没有被酶切好不一定因为酶失活了，这只是其中一个原因而已，还有可能是
1、质粒本身提取得不干净，我有一个质粒，两批养菌提取的分别用来酶切，同样的条件，结果其中一批就是酶切得不够完全。
2、缓冲液没选对，有的酶附送的缓冲液包装的EP管上没有写明适用的酶，只写明了种类，可能没有阅读酶的说明书，选用了不是最合适的缓冲液。
3、酶切的温度和时间不合适等等。

内切酶最终还是要在室温或者37度（而不是-20度）下催化反应的，如果在外面暴露时间不长，应该不会那么脆弱。你的酶先别丢，看看上面的是不是都对了，再酶切一次，同时酶切一个容易酶切的质粒，比较一下效果就知道酶有没有失活了。