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bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后消失了

最近把目的基因连到了pPIC9K质粒上,要转化毕赤酵母,转化之前用SalI酶切线性化,电泳检测重组质粒没有问题,但是空质粒酶切后就什么片段都没有了,没有酶切的空质粒电泳后是有条带的,请教各位高手这会是什么原因呢?我已经做了3遍了,每次都一样。图上左起一次是没有酶切的重组质粒、酶切后的重组质粒、marker、酶切后的空质粒、没有酶切的空质粒。
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-01 21:30:00
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:02:33
空载体提取时,用酚-氯仿抽提没有?
2楼2011-06-30 18:58:13
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bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by yandz680717 at 2011-06-30 18:58:13:
空载体提取时,用酚-氯仿抽提没有?

我是用试剂盒提取的,没有用酚-氯仿抽提,和这个有关吗?
3楼2011-06-30 20:54:26
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hooroberts

新虫 (小有名气)

酶切了多久,可能切过了
4楼2011-06-30 21:10:48
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ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-01 21:30:14
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-11 19:33:50
可能切久了会降解,请问酶切体系与时间啊?
5楼2011-06-30 21:19:44
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bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ty1987 at 2011-06-30 21:19:44:
可能切久了会降解,请问酶切体系与时间啊?

50ul体系,其中质粒30ul,SalI 2ul,37℃酶切3h。重组质粒是用同样的条件切的,重组质粒就没降解。
6楼2011-06-30 21:58:59
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ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-01 01:55:24
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:02:02
引用回帖:
Originally posted by bigplantgirl at 2011-06-30 21:58:59:
50ul体系,其中质粒30ul,SalI 2ul,37℃酶切3h。重组质粒是用同样的条件切的,重组质粒就没降解。

那体系跟时间都没什么问题啊,那真是奇怪啊,怎么会没呢?跑电泳图的空载和酶切的空载是同一批提的吗?进行酶切的那个质粒没问题吧!
7楼2011-06-30 22:54:42
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zgb1982

木虫 (正式写手)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-01 01:55:40
应该是质粒提取的有问题,酶切后会降解了
8楼2011-07-01 00:49:37
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bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ty1987 at 2011-06-30 22:54:42:
那体系跟时间都没什么问题啊,那真是奇怪啊,怎么会没呢?跑电泳图的空载和酶切的空载是同一批提的吗?进行酶切的那个质粒没问题吧!

是同一批提的,我今天做了这个空质粒的双酶切,跑电泳也没有条带,一定是质粒降解了,但是我又找不到原因,其他质粒都没事的。
9楼2011-07-01 21:05:30
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shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:01:28
内容已删除
10楼2011-07-02 15:32:26
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