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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

[交流] 【其他】【欢迎参与】积极分享自己实验过程中的小技巧【有奖活动】

【欢迎参与】积极分享自己实验过程中的小技巧【有奖活动】



        

在我们平时做实验的时候，都会自创或者从其他地方学到、看到很多实验的小技巧

这样对实验来说，既简单又省时间，并且成功率又高

        在这里我们不妨与各位虫友一起分享您的成功的、您觉得有用的实验小技巧

我将定期把所有的小技巧编辑到二楼、三楼等地方，方便各位虫友的查看与学习

也欢迎各位虫友对这些小技巧，提出建议与意见

        也许你的分享，就会使其他虫友受益匪浅，会有虫友对您感激

        凡分享实验中的小技巧者，都将有一定的金币奖励

        欢迎大家积极分享，不吝惜自己的小技巧哦






举2个例子先：

1、冬天的时候，配制SDS-PAGE胶的时候，凝的会比较慢，可以放到恒温培养箱中，这样基本5-10分钟就会完全凝，不会影响SDS-PAGE的效果跟电泳图的美观；

2、配制SDS-PAGE胶的时候，经常会有漏胶的问题，在垂直板的下面抹一点凡士林或者加一条石蜡封口膜就好了

[ Last edited by rainwander on 2011-1-15 at 20:37 ]
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1楼2011-01-15 20:30:57
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
rainwander
1、冬天的时候，配制SDS-PAGE胶的时候，凝的会比较慢，可以放到恒温培养箱中，这样基本5-10分钟就会完全凝，不会影响SDS-PAGE的效果跟电泳图的美观；
2、配制SDS-PAGE胶的时候，经常会有漏胶的问题，在垂直板的下面抹一点凡士林或者加一条石蜡封口膜就好了。
天使托
1：倒板子的时候，剧烈晃动之后如何减少气泡的产生呢？原来我要着急倒板子，就将熔化的培养基用水冲，倒是凉的快，可是会产生很多气泡，遇到这种情况呢，可以将瓶子慢慢的转，这样，气泡就会慢慢消失，即便消失不了，也会靠壁，这样倒的板子就不会有气泡了！
2：手提质粒的时候，最后加入RNA水的时候，不要着急去点样，因为手提的质粒不纯，而且RNA比较多，如果着急点样的话，跑出来的带RNA会很多，可以加入RNA水后放上一会，使RNA被RNA酶慢慢分解后再去点样，这样跑出来的带相对来说比较好一点！
dream-fish  
1、抽质粒最后加的水最好加热到60°，离心下来的水再次加到离心柱中，再洗脱一次。这样的质粒会非常亮。
2、涂板的时候，如果样品很多，要烧很多涂抹棒，那样很费时间，可以用灭菌过的玻璃珠，一次加5到6颗，晃一晃就好，非常方便。一次可以灭很多玻璃珠的。
susizheng  
牙签的妙用。
1、用牙签挑菌，速度快、好、省这些大家肯定知道，就不多说了。
2、提质粒的时候，加入溶液I后要悬浮，大家通常的做法是用枪吸打，但是由于溶液I中有SDS，这样会导致产生泡沫，菌体量大的话，有时候全部吸打成泡沫了，而且，当你提8-10份质粒的时候，全部吸打完毕，手都要抽筋了。我的做法是，用牙签先将菌体挑松，然后将牙签放在EP管中，将EP管放至漩涡震荡仪上，这样伴随着漩涡震荡仪的震荡，牙签会在EP管中飞速搅拌，这样混匀，只需要3-4S，而且效果比枪吸打要好。
3、制蛋白样的时候，收集菌体，加入蛋白上样缓冲液后，将菌体重悬，由于蛋白上样缓冲液中也有SDS，而且蛋白缓冲液量较少（一般1mL菌液收集菌体后，我用100uL蛋白上样缓冲液），这时候，用枪吸打很容易产生泡沫，不利于后面的煮样，但是同样用上面的方法的话，效果会很好。
funny8125
1、提DNA的时候，需要用氯仿抽提，离心后取上清的时候，可以用剪刀把枪头的前面剪掉，这样吸取上清的时候，能尽量避免洗到下层的氯仿。
2、做PCR的时候，可以等PCR仪温度升到72度以上的时候，再把样品放入，这样可以减少引物二聚体。
real339
1、农杆菌质粒拷贝数低，不易用酶切鉴定，可提质粒转化大肠杆菌，再提大肠杆菌质粒进行酶切鉴定。

[ Last edited by rainwander on 2011-1-18 at 11:21 ]
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2楼2011-01-15 20:35:39
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
xp198766
大家有许多序列需要批量blast的时候，可以考虑NCBI的netblast脚本，或者DDBJ数据库，里面支持在线BLAST，可以选择将结果发到指定邮箱；
DDBJ还支持在线alignment，也可以到指定邮箱，非常方便，EBI也有此功能，但是序列有限制（<500条）；

[ Last edited by rainwander on 2011-1-16 at 13:05 ]
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3楼2011-01-15 20:35:44
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
占用
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4楼2011-01-15 20:36:02
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
支持活动
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5楼2011-01-15 21:49:33
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天使托

专家顾问 (职业作家)
rainwander(金币+2):很好，谢谢分享~~~ 2011-01-16 09:54:09
rainwander(金币+2):你是第一个，额外赠送~~ 2011-01-16 09:54:40
我也来一个：
1：倒板子的时候，剧烈晃动之后如何减少气泡的产生呢？原来我要着急倒板子，就将熔化的培养基用水冲，倒是凉的快，可是会产生很多气泡，遇到这种情况呢，可以将瓶子慢慢的转，这样，气泡就会慢慢消失，即便消失不了，也会靠壁，这样倒的板子就不会有气泡了！

2：手提质粒的时候，最后加入RNA水的时候，不要着急去点样，因为手提的质粒不纯，而且RNA比较多，如果着急点样的话，跑出来的带RNA会很多，可以加入RNA水后放上一会，使RNA被RNA酶慢慢分解后再去点样，这样跑出来的带相对来说比较好一点！
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6楼2011-01-16 09:35:45
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dream-fish

银虫 (小有名气)
rainwander(金币+2):恩，很好，谢谢分享 2011-01-16 12:04:45
抽质粒最后加的水最好加热到60°，离心下来的水再次加到离心柱中，再洗脱一次。这样的质粒会非常亮。
涂板的时候，如果样品很多，要烧很多涂抹棒，那样很费时间，可以用灭菌过的玻璃珠，一次加5到6颗，晃一晃就好，非常方便。一次可以灭很多玻璃珠的。
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7楼2011-01-16 11:17:46
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)
rainwander(金币+2): 呵呵，算，奖励一下~~~谢谢分享~~ 2011-01-16 13:02:53
不知道这个算不算：
大家有许多序列需要批量blast的时候，可以考虑NCBI的netblast脚本，或者DDBJ数据库，里面支持在线BLAST，可以选择将结果发到指定邮箱；
DDBJ还支持在线alignment，也可以到指定邮箱，非常方便，EBI也有此功能，但是序列有限制（<500条）；
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8楼2011-01-16 12:49:59
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susizheng

木虫 (著名写手)
rainwander(金币+2): 恩，很好，很好~~谢谢分享分享~~~ 2011-01-16 20:56:42
牙签的妙用。
1，用牙签挑菌，速度快、好、省这些大家肯定知道，就不多说了。
2，提质粒的时候，加入溶液I后要悬浮，大家通常的做法是用枪吸打，但是由于溶液I中有SDS，这样会导致产生泡沫，菌体量大的话，有时候全部吸打成泡沫了，而且，当你提8-10份质粒的时候，全部吸打完毕，手都要抽筋了。我的做法是，用牙签先将菌体挑松，然后将牙签放在EP管中，将EP管放至漩涡震荡仪上，这样伴随着漩涡震荡仪的震荡，牙签会在EP管中飞速搅拌，这样混匀，只需要3-4S，而且效果比枪吸打要好。
3，制蛋白样的时候，收集菌体，加入蛋白上样缓冲液后，将菌体重悬，由于蛋白上样缓冲液中也有SDS，而且蛋白缓冲液量较少（一般1mL菌液收集菌体后，我用100uL蛋白上样缓冲液），这时候，用枪吸打很容易产生泡沫，不利于后面的煮样，但是同样用上面的方法的话，效果会很好。

[ Last edited by susizheng on 2011-1-16 at 20:38 ]
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9楼2011-01-16 20:37:00
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funny8125

银虫 (小有名气)
rainwander(金币+2): 很不错，谢谢分享~~~ 2011-01-17 16:25:00
我实验过程中的一些小细节，希望对大家有用！
1，提DNA的时候，需要用氯仿抽提，离心后取上清的时候，可以用剪刀把枪头的前面剪掉，这样吸取上清的时候，能尽量避免洗到下层的氯仿。
2，做PCR的时候，可以等PCR仪温度升到72度以上的时候，再把样品放入，这样可以减少引物二聚体。
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10楼2011-01-17 10:12:29
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mahuanqing

铁虫 (著名写手)
rainwander: 你可以分享一下你的小技巧啊 2011-01-28 14:13:05
我也来一个：
1：倒板子的时候，剧烈晃动之后如何减少气泡的产生呢？原来我要着急倒板子，就将熔化的培养基用水冲，倒是凉的快，可是会产生很多气泡，遇到这种情况呢，可以将瓶子慢慢的转，这样，气泡就会慢慢消失，即便消失不了，也会靠壁，这样倒的板子就不会有气泡了！

2：手提质粒的时候，最后加入RNA水的时候，不要着急去点样，因为手提的质粒不纯，而且RNA比较多，如果着急点样的话，跑出来的带RNA会很多，可以加入RNA水后放上一会，使RNA被RNA酶慢慢分解后再去点样，这样跑出来的带相对来说比较好一点！
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2803390
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11楼2011-01-17 16:51:56
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by mahuanqing at 2011-01-17 16:51:56:
我也来一个：
1：倒板子的时候，剧烈晃动之后如何减少气泡的产生呢？原来我要着急倒板子，就将熔化的培养基用水冲，倒是凉的快，可是会产生很多气泡，遇到这种情况呢，可以将瓶子慢慢的转，这样，气泡就会慢慢消 ...

重复了，就算是重复的小技巧，但，你也不能一字不差吧

欢迎你分享实验中的小技巧
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12楼2011-01-17 17:04:53
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real339

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 谢谢分享~~~ 2011-01-18 11:19:34
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与 2011-01-28 14:13:56
农杆菌质粒拷贝数低，不易用酶切鉴定，可提质粒转化大肠杆菌，再提大肠杆菌质粒进行酶切鉴定。
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14楼2011-01-18 10:56:53
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
好像大家都不太积极啊
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15楼2011-01-24 08:52:43
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8601

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
关于牙签的妙用那一节
提质粒时，加完溶液1后要打散细菌时，不必吸打或搅动。只需拿一个放EP管的塑料支架，用手捏着放着细菌的EP管上端然后下端用力在支架上划几下即可。
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16楼2013-05-22 06:03:45
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by dream-fish at 2011-01-16 11:17:46
抽质粒最后加的水最好加热到60°，离心下来的水再次加到离心柱中，再洗脱一次。这样的质粒会非常亮。
涂板的时候，如果样品很多，要烧很多涂抹棒，那样很费时间，可以用灭菌过的玻璃珠，一次加5到6颗，晃一晃就好， ...

您好，玻璃珠最后怎么取出呢？直接用手拿么？
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17楼2014-04-25 09:12:24
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yusuya13楼
2011-01-17 19:38   回复  
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