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举2个例子先： 1、冬天的时候，配制SDS-PAGE胶的时候，凝的会比较慢，可以放到恒温培养箱中，这样基本5-10分钟就会完全凝，不会影响SDS-PAGE的效果跟电泳图的美观； 2、配制SDS-PAGE胶的时候，经常会有漏胶的问题，在垂直板的下面抹一点凡士林或者加一条石蜡封口膜就好了 [ Last edited by rainwander on 2011-1-15 at 20:37 ] |
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rainwander(金币+2): 恩，很好，很好~~谢谢分享分享~~~ 2011-01-16 20:56:42
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牙签的妙用。 1，用牙签挑菌，速度快、好、省这些大家肯定知道，就不多说了。 2，提质粒的时候，加入溶液I后要悬浮，大家通常的做法是用枪吸打，但是由于溶液I中有SDS，这样会导致产生泡沫，菌体量大的话，有时候全部吸打成泡沫了，而且，当你提8-10份质粒的时候，全部吸打完毕，手都要抽筋了。我的做法是，用牙签先将菌体挑松，然后将牙签放在EP管中，将EP管放至漩涡震荡仪上，这样伴随着漩涡震荡仪的震荡，牙签会在EP管中飞速搅拌，这样混匀，只需要3-4S，而且效果比枪吸打要好。 3，制蛋白样的时候，收集菌体，加入蛋白上样缓冲液后，将菌体重悬，由于蛋白上样缓冲液中也有SDS，而且蛋白缓冲液量较少（一般1mL菌液收集菌体后，我用100uL蛋白上样缓冲液），这时候，用枪吸打很容易产生泡沫，不利于后面的煮样，但是同样用上面的方法的话，效果会很好。 [ Last edited by susizheng on 2011-1-16 at 20:38 ] |
9楼2011-01-16 20:37:00
 rainwander1、冬天的时候，配制SDS-PAGE胶的时候，凝的会比较慢，可以放到恒温培养箱中，这样基本5-10分钟就会完全凝，不会影响SDS-PAGE的效果跟电泳图的美观； 2、配制SDS-PAGE胶的时候，经常会有漏胶的问题，在垂直板的下面抹一点凡士林或者加一条石蜡封口膜就好了。 天使托1：倒板子的时候，剧烈晃动之后如何减少气泡的产生呢？原来我要着急倒板子，就将熔化的培养基用水冲，倒是凉的快，可是会产生很多气泡，遇到这种情况呢，可以将瓶子慢慢的转，这样，气泡就会慢慢消失，即便消失不了，也会靠壁，这样倒的板子就不会有气泡了！ 2：手提质粒的时候，最后加入RNA水的时候，不要着急去点样，因为手提的质粒不纯，而且RNA比较多，如果着急点样的话，跑出来的带RNA会很多，可以加入RNA水后放上一会，使RNA被RNA酶慢慢分解后再去点样，这样跑出来的带相对来说比较好一点！ dream-fish 1、抽质粒最后加的水最好加热到60°，离心下来的水再次加到离心柱中，再洗脱一次。这样的质粒会非常亮。 2、涂板的时候，如果样品很多，要烧很多涂抹棒，那样很费时间，可以用灭菌过的玻璃珠，一次加5到6颗，晃一晃就好，非常方便。一次可以灭很多玻璃珠的。 susizheng 牙签的妙用。 1、用牙签挑菌，速度快、好、省这些大家肯定知道，就不多说了。 2、提质粒的时候，加入溶液I后要悬浮，大家通常的做法是用枪吸打，但是由于溶液I中有SDS，这样会导致产生泡沫，菌体量大的话，有时候全部吸打成泡沫了，而且，当你提8-10份质粒的时候，全部吸打完毕，手都要抽筋了。我的做法是，用牙签先将菌体挑松，然后将牙签放在EP管中，将EP管放至漩涡震荡仪上，这样伴随着漩涡震荡仪的震荡，牙签会在EP管中飞速搅拌，这样混匀，只需要3-4S，而且效果比枪吸打要好。 3、制蛋白样的时候，收集菌体，加入蛋白上样缓冲液后，将菌体重悬，由于蛋白上样缓冲液中也有SDS，而且蛋白缓冲液量较少（一般1mL菌液收集菌体后，我用100uL蛋白上样缓冲液），这时候，用枪吸打很容易产生泡沫，不利于后面的煮样，但是同样用上面的方法的话，效果会很好。 funny8125 1、提DNA的时候，需要用氯仿抽提，离心后取上清的时候，可以用剪刀把枪头的前面剪掉，这样吸取上清的时候，能尽量避免洗到下层的氯仿。 2、做PCR的时候，可以等PCR仪温度升到72度以上的时候，再把样品放入，这样可以减少引物二聚体。 real3391、农杆菌质粒拷贝数低，不易用酶切鉴定，可提质粒转化大肠杆菌，再提大肠杆菌质粒进行酶切鉴定。 [ Last edited by rainwander on 2011-1-18 at 11:21 ] |
2楼2011-01-15 20:35:39
3楼2011-01-15 20:35:44
rainwander(金币+2):很好，谢谢分享~~~ 2011-01-16 09:54:09
rainwander(金币+2):你是第一个，额外赠送~~ 2011-01-16 09:54:40
rainwander(金币+2):你是第一个，额外赠送~~ 2011-01-16 09:54:40
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我也来一个： 1：倒板子的时候，剧烈晃动之后如何减少气泡的产生呢？原来我要着急倒板子，就将熔化的培养基用水冲，倒是凉的快，可是会产生很多气泡，遇到这种情况呢，可以将瓶子慢慢的转，这样，气泡就会慢慢消失，即便消失不了，也会靠壁，这样倒的板子就不会有气泡了！ 2：手提质粒的时候，最后加入RNA水的时候，不要着急去点样，因为手提的质粒不纯，而且RNA比较多，如果着急点样的话，跑出来的带RNA会很多，可以加入RNA水后放上一会，使RNA被RNA酶慢慢分解后再去点样，这样跑出来的带相对来说比较好一点！ |
6楼2011-01-16 09:35:45
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yusuya13楼
2011-01-17 19:38
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