应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切后消失了
121/2返回列表12下一页
查看: 2808  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后消失了

最近把目的基因连到了pPIC9K质粒上，要转化毕赤酵母，转化之前用SalI酶切线性化，电泳检测重组质粒没有问题，但是空质粒酶切后就什么片段都没有了，没有酶切的空质粒电泳后是有条带的，请教各位高手这会是什么原因呢？我已经做了3遍了，每次都一样。图上左起一次是没有酶切的重组质粒、酶切后的重组质粒、marker、酶切后的空质粒、没有酶切的空质粒。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-30 18:07:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-01 21:30:00
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:02:33
空载体提取时，用酚-氯仿抽提没有？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-30 18:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yandz680717 at 2011-06-30 18:58:13:
空载体提取时，用酚-氯仿抽提没有？

我是用试剂盒提取的，没有用酚-氯仿抽提，和这个有关吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-30 20:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)
酶切了多久，可能切过了
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-30 21:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-01 21:30:14
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-11 19:33:50
可能切久了会降解，请问酶切体系与时间啊？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-30 21:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ty1987 at 2011-06-30 21:19:44:
可能切久了会降解，请问酶切体系与时间啊？

50ul体系，其中质粒30ul，SalI 2ul，37℃酶切3h。重组质粒是用同样的条件切的，重组质粒就没降解。
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-30 21:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-01 01:55:24
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:02:02
引用回帖:
Originally posted by bigplantgirl at 2011-06-30 21:58:59:
50ul体系，其中质粒30ul，SalI 2ul，37℃酶切3h。重组质粒是用同样的条件切的，重组质粒就没降解。

那体系跟时间都没什么问题啊，那真是奇怪啊，怎么会没呢？跑电泳图的空载和酶切的空载是同一批提的吗？进行酶切的那个质粒没问题吧！
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-06-30 22:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-01 01:55:40
应该是质粒提取的有问题，酶切后会降解了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-07-01 00:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ty1987 at 2011-06-30 22:54:42:
那体系跟时间都没什么问题啊，那真是奇怪啊，怎么会没呢？跑电泳图的空载和酶切的空载是同一批提的吗？进行酶切的那个质粒没问题吧！

是同一批提的，我今天做了这个空质粒的双酶切，跑电泳也没有条带，一定是质粒降解了，但是我又找不到原因，其他质粒都没事的。
赞一下 回复此楼
9楼2011-07-01 21:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:01:28
内容已删除
赞一下 回复此楼
10楼2011-07-02 15:32:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bigplantgirl 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭