应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切后消失了
121/2返回列表12下一页
查看: 2836  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后消失了

最近把目的基因连到了pPIC9K质粒上，要转化毕赤酵母，转化之前用SalI酶切线性化，电泳检测重组质粒没有问题，但是空质粒酶切后就什么片段都没有了，没有酶切的空质粒电泳后是有条带的，请教各位高手这会是什么原因呢？我已经做了3遍了，每次都一样。图上左起一次是没有酶切的重组质粒、酶切后的重组质粒、marker、酶切后的空质粒、没有酶切的空质粒。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-30 18:07:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-01 21:30:00
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:02:33
空载体提取时，用酚-氯仿抽提没有？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-30 18:58:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yandz680717 at 2011-06-30 18:58:13:
空载体提取时，用酚-氯仿抽提没有？

我是用试剂盒提取的，没有用酚-氯仿抽提，和这个有关吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-30 20:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooroberts

新虫 (小有名气)
酶切了多久，可能切过了
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-30 21:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-01 21:30:14
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-11 19:33:50
可能切久了会降解，请问酶切体系与时间啊？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-30 21:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ty1987 at 2011-06-30 21:19:44:
可能切久了会降解，请问酶切体系与时间啊？

50ul体系，其中质粒30ul，SalI 2ul，37℃酶切3h。重组质粒是用同样的条件切的，重组质粒就没降解。
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-30 21:58:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ty1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-01 01:55:24
bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:02:02
引用回帖:
Originally posted by bigplantgirl at 2011-06-30 21:58:59:
50ul体系，其中质粒30ul，SalI 2ul，37℃酶切3h。重组质粒是用同样的条件切的，重组质粒就没降解。

那体系跟时间都没什么问题啊，那真是奇怪啊，怎么会没呢？跑电泳图的空载和酶切的空载是同一批提的吗？进行酶切的那个质粒没问题吧！
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-06-30 22:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-01 01:55:40
应该是质粒提取的有问题，酶切后会降解了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-07-01 00:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigplantgirl

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ty1987 at 2011-06-30 22:54:42:
那体系跟时间都没什么问题啊，那真是奇怪啊，怎么会没呢？跑电泳图的空载和酶切的空载是同一批提的吗？进行酶切的那个质粒没问题吧！

是同一批提的，我今天做了这个空质粒的双酶切，跑电泳也没有条带，一定是质粒降解了，但是我又找不到原因，其他质粒都没事的。
赞一下 回复此楼
9楼2011-07-01 21:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bigplantgirl(金币+1): 2011-07-06 19:01:28
内容已删除
赞一下 回复此楼
10楼2011-07-02 15:32:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bigplantgirl 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 311求调剂 +13 冬十三 2026-03-15 14/700 2026-03-21 22:10 by peike
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +3 zxts12 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:34 by 33来了真来了
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +6 梨花珞晚风 2026-03-17 6/300 2026-03-21 03:40 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 324求调剂 +5 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 5/250 2026-03-20 22:30 by 促天成
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭