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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒，酶切前比酶切后跑的还快，神了？？！！！
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未知树

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】质粒，酶切前比酶切后跑的还快，神了？？！！！ 已有11人参与

最近做酶切，遇到一个非常神奇的事情。 希望大家能够解释下，非常感谢！

用试剂盒提取了质粒，用不同的酶进行单酶切。结果发现：
1，线性化的质粒，大小与理论值相符合。
2，原质粒，竟然比酶切后线性化都跑得快？？？！！
PS：原质粒是用QIANGEN质粒抽提试剂盒提取的，应该是没有问题的。
但是，为什么质粒会跑的这么快啊！
质粒大小3341bp,  却跑到了2500bp左右。
难道说，超螺旋能够跑这么快？ 并且，电泳显示，提取的质粒只有一条带（一般都是三条带）。

M,1,2,3,4,5,6,7

M：DNA marker
1, 1号质粒单酶切Afl II;  2, 1号质粒单酶切EcoRV; 3, 1号质粒单酶切Not I
4, 2号质粒单酶切Afl II;  5, 2号质粒单酶切EcoRV; 6, 2号质粒单酶切Not I
7,2号原质粒（没有酶切）


[ Last edited by 未知树 on 2011-3-15 at 18:41 ]
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每一天都是一个新的起点
1楼 2011-03-14 21:33:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huzhihong-

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+3): 鼓励新虫积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:24:40
这很正常，由于质粒的性质，酶切前全部是超螺旋状态酶切后为线性，超螺旋比线性跑的快···
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2楼2011-03-15 00:02:16
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普通回帖

十比

木虫 (著名写手)
这非常正常的。
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3楼2011-03-15 10:34:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很正常啊！超螺旋本身就跑的比较快！
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4楼2011-03-15 10:59:06
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未知树

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-15 10:59:06:
很正常啊！超螺旋本身就跑的比较快！

啊，但是，我提取的质粒，怎么就只有超螺旋一种形式啊？一般而言，都是三条带，即使提取质量高，也是超螺旋多点儿。
现在的情况是，看不到另外两条带，只有超螺旋一条带了。
是因为提取的效果好，不是因为别的吗？

实在是不明白啊
请帮忙分析下，万分感谢。。。。。。。。。
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每一天都是一个新的起点
5楼2011-03-15 18:38:14
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:24:49
引用回帖:
Originally posted by 未知树 at 2011-03-15 18:38:14:
啊，但是，我提取的质粒，怎么就只有超螺旋一种形式啊？一般而言，都是三条带，即使提取质量高，也是超螺旋多点儿。
现在的情况是，看不到另外两条带，只有超螺旋一条带了。
是因为提取的效果好，不是因为别 ...

理论上确实是三条带，超螺旋，螺旋，线性。但是实际情况下并不是总会是三条带，我见的最多的是两条带，一条带也有啊！
其实你酶切一下只要质粒大小对就可以了，没有必要在乎是否是一条带的！
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6楼2011-03-15 19:39:10
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cellline

木虫 (正式写手)
★ ★
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rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:25:00
出现三条带的情况很多，你只看到一条，很可能是其他两条很弱，在照相的时候，你若进行强曝光或就有可能看到其他两条核酸电泳带
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7楼2011-03-15 20:42:11
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未知树

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by cellline at 2011-03-15 20:42:11:
出现三条带的情况很多，你只看到一条，很可能是其他两条很弱，在照相的时候，你若进行强曝光或就有可能看到其他两条核酸电泳带

非常感谢，我采用强曝光，真的看到了两条微弱到不能再微弱的条带。
安心了，谢谢你的建议~
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每一天都是一个新的起点
8楼2011-03-16 00:00:39
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julia9981

铜虫 (小有名气)
正常
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9楼2011-03-16 09:57:09
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果DNA提取得比较好的话应该是2条带，而且跑得快的（超螺旋）比较亮。酶切后的质粒处于两条带之间
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10楼2011-03-28 16:14:54
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