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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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未知树

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】质粒,酶切前比酶切后跑的还快,神了??!!! 已有11人参与

最近做酶切,遇到一个非常神奇的事情。 希望大家能够解释下,非常感谢!

用试剂盒提取了质粒,用不同的酶进行单酶切。结果发现:
1,线性化的质粒,大小与理论值相符合。
2,原质粒,竟然比酶切后线性化都跑得快???!!
PS:原质粒是用QIANGEN质粒抽提试剂盒提取的,应该是没有问题的。
但是,为什么质粒会跑的这么快啊!
质粒大小3341bp,  却跑到了2500bp左右。
难道说,超螺旋能够跑这么快? 并且,电泳显示,提取的质粒只有一条带(一般都是三条带)。

M,1,2,3,4,5,6,7

M:DNA marker
1, 1号质粒单酶切Afl II;  2, 1号质粒单酶切EcoRV; 3, 1号质粒单酶切Not I
4, 2号质粒单酶切Afl II;  5, 2号质粒单酶切EcoRV; 6, 2号质粒单酶切Not I
7,2号原质粒(没有酶切)


[ Last edited by 未知树 on 2011-3-15 at 18:41 ]
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huzhihong-

新虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
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rainwander(金币+3): 鼓励新虫积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:24:40
这很正常,由于质粒的性质,酶切前全部是超螺旋状态酶切后为线性,超螺旋比线性跑的快···
2楼2011-03-15 00:02:16
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普通回帖

十比

木虫 (著名写手)

这非常正常的。
3楼2011-03-15 10:34:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


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很正常啊!超螺旋本身就跑的比较快!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-03-15 10:59:06
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未知树

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-15 10:59:06:
很正常啊!超螺旋本身就跑的比较快!

啊,但是,我提取的质粒,怎么就只有超螺旋一种形式啊?一般而言,都是三条带,即使提取质量高,也是超螺旋多点儿。
现在的情况是,看不到另外两条带,只有超螺旋一条带了。
是因为提取的效果好,不是因为别的吗?

实在是不明白啊
请帮忙分析下,万分感谢。。。。。。。。。
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5楼2011-03-15 18:38:14
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★
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rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:24:49
引用回帖:
Originally posted by 未知树 at 2011-03-15 18:38:14:
啊,但是,我提取的质粒,怎么就只有超螺旋一种形式啊?一般而言,都是三条带,即使提取质量高,也是超螺旋多点儿。
现在的情况是,看不到另外两条带,只有超螺旋一条带了。
是因为提取的效果好,不是因为别 ...

理论上确实是三条带,超螺旋,螺旋,线性。但是实际情况下并不是总会是三条带,我见的最多的是两条带,一条带也有啊!
其实你酶切一下只要质粒大小对就可以了,没有必要在乎是否是一条带的!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-03-15 19:39:10
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cellline

木虫 (正式写手)

★ ★
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rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:25:00
出现三条带的情况很多,你只看到一条,很可能是其他两条很弱,在照相的时候,你若进行强曝光或就有可能看到其他两条核酸电泳带
7楼2011-03-15 20:42:11
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未知树

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by cellline at 2011-03-15 20:42:11:
出现三条带的情况很多,你只看到一条,很可能是其他两条很弱,在照相的时候,你若进行强曝光或就有可能看到其他两条核酸电泳带

非常感谢,我采用强曝光,真的看到了两条微弱到不能再微弱的条带。
安心了,谢谢你的建议~
每一天都是一个新的起点
8楼2011-03-16 00:00:39
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julia9981

铜虫 (小有名气)

9楼2011-03-16 09:57:09
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另一个天堂

金虫 (小有名气)


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如果DNA提取得比较好的话应该是2条带,而且跑得快的(超螺旋)比较亮。酶切后的质粒处于两条带之间
10楼2011-03-28 16:14:54
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