应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 3301质粒 用EcoI 和HandⅢ 无法酶切
71/1返回列表
查看: 1623  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tanxi125

银虫 (小有名气)

[求助] 3301质粒 用EcoI 和HandⅢ 无法酶切

3301质粒 用EcoI 和HandⅢ 无法酶切
用的是两个酶的通用buffer  R
  体系是20μl 体系

ddH2O            12μl
10×buffer R    2μl
质粒           4μl
EcoI                    1μl
HandⅢ       1μl
37℃过夜
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
什么都得靠自己！我现在深刻理解！
1楼 2011-10-17 21:12:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

tanxi125(金币+2): 2011-11-30 19:42:20
37度过夜这个时间太长，可试一下16度过夜
赞一下 回复此楼
2楼2011-10-18 10:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanxi125

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-18 10:08:13:
37度过夜这个时间太长，可试一下16度过夜

时间长 难道不就酶切的更加完全吗
赞一下 回复此楼
什么都得靠自己！我现在深刻理解！
3楼2011-10-18 12:03:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流，欢迎常来 2011-10-18 16:30:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by tanxi125 at 2011-10-18 12:03:05:
时间长 难道不就酶切的更加完全吗

时间长 当然能酶切的更加完全，关键是你时间太长，有可能全部切烂了，提出的问题没说是切不开还是其它状况，但这么长的时间肯定是有问题的，另外 ，如果你用双酶切质粒切不开，那你可以分别试一下单切 效果，按理说这两个酶双切用通用buffer很好切才对的呀，我们常用，效果不错的呀，，，如果你单切不开，那可能就是酶有问题了，可考虑换支新酶试试
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-10-18 12:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死
handIII 还是hindIII
赞一下 回复此楼
不让吃就去死
5楼2011-10-19 03:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用的那个公司的酶？在切割超螺旋DNA时，有的公司的酶是需要加大用量的！
赞一下 回复此楼
6楼2011-10-20 11:20:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

话说你这两个位点选的中间保护碱基不足，同时双切能切好的可能性不大。能换位点最好，实在不能换就先切后面的那个，再切前面的，可能会好些，但后切的那个肯定会由于保护碱基不足切的不是特别好。
顺便问一句，酶切为啥要过夜啊，线性化片段最多半个小时，质粒一个小时也够了，切那么久干嘛。
赞一下 回复此楼
7楼2011-10-20 12:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tanxi125 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 言之凿凿，8月21号(明天)放榜 +13 医学老男孩 2026-08-20 15/750 2026-08-20 15:19 by chengyan1220
[基金申请] 时间戳又变了 +3 wuchongjun 2026-08-20 4/200 2026-08-20 15:18 by felixwseu
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +17 基诺咪客 2026-08-17 21/1050 2026-08-20 14:54 by 昝占全2025
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭