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tanxi125

银虫 (小有名气)

[求助] 3301质粒 用EcoI 和HandⅢ 无法酶切

3301质粒 用EcoI 和HandⅢ 无法酶切
用的是两个酶的通用buffer  R
  体系是20μl 体系

ddH2O            12μl
10×buffer R    2μl
质粒           4μl
EcoI                    1μl
HandⅢ       1μl
37℃过夜
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什么都得靠自己!我现在深刻理解!
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

tanxi125(金币+2): 2011-11-30 19:42:20
37度过夜这个时间太长,可试一下16度过夜
2楼2011-10-18 10:08:13
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tanxi125

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-18 10:08:13:
37度过夜这个时间太长,可试一下16度过夜

时间长 难道不就酶切的更加完全吗
什么都得靠自己!我现在深刻理解!
3楼2011-10-18 12:03:05
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流,欢迎常来 2011-10-18 16:30:57
引用回帖:
3楼: Originally posted by tanxi125 at 2011-10-18 12:03:05:
时间长 难道不就酶切的更加完全吗

时间长 当然能酶切的更加完全,关键是你时间太长,有可能全部切烂了,提出的问题没说是切不开还是其它状况,但这么长的时间肯定是有问题的,另外 ,如果你用双酶切质粒切不开,那你可以分别试一下单切 效果,按理说这两个酶双切用通用buffer很好切才对的呀,我们常用,效果不错的呀,,,如果你单切不开,那可能就是酶有问题了,可考虑换支新酶试试
4楼2011-10-18 12:09:18
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死

handIII 还是hindIII
不让吃就去死
5楼2011-10-19 03:31:08
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用的那个公司的酶?在切割超螺旋DNA时,有的公司的酶是需要加大用量的!
6楼2011-10-20 11:20:44
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

话说你这两个位点选的中间保护碱基不足,同时双切能切好的可能性不大。能换位点最好,实在不能换就先切后面的那个,再切前面的,可能会好些,但后切的那个肯定会由于保护碱基不足切的不是特别好。
顺便问一句,酶切为啥要过夜啊,线性化片段最多半个小时,质粒一个小时也够了,切那么久干嘛。
7楼2011-10-20 12:43:34
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