24小时热门版块排行榜    

查看: 2271  |  回复: 6

tanxi125

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒双酶切,看图! 已有6人参与

我是将我括的目的条带连在T载体上,目的片段1380bp左右。T载体用的是宝生物的PMD-18载体有2692bp。我用的是Ecor1和Hand3 两个酶切的。插入位点在这两个酶切位点之间,两个酶切位点相距六七十个bp,那么酶切后我的目的片段应该是1400左右。M分别是300bp.500bp.800bp.1000bp.1500bp.3000bp.剩下的是4000bp-10000bp。比较亮的条带是载体大概在3000bp下面,这样看起来应该没错。但是在1500bp-1000bp下面的条带特别弱,而且看起来也不到1400bp,不知道是不是我的目的条带!
回复此楼
什么都得靠自己!我现在深刻理解!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-13 15:07:35
不大靠谱,载体条带那么亮,摩尔量一样,按道理,目的条带应该有载体亮度一半亮才对。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-01-13 14:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-13 15:07:50
这么弱,和最亮的不成比例,而且最前面怎么还有带呀?
3楼2011-01-13 14:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-13 15:08:06
你这个marker怎么跑成这样了?楼主说的目的条带是可以看到,可是也太淡了点吧?
能不能做一个pcr验证一下呢?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-01-13 14:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2011-01-13 15:08:20
目的条带可能是正确的,说可能是你的Marker跑歪了,说正确是它确实在那个位置,但是亮度明显不够,是不是用的TAKARA的内切酶,是的话,检查一下这两种酶在你用的那种Buffer里面的活性,是不是有一个活性特别低,或者两个都很低?还有,酶切时间的问题,也要考虑,你的质粒浓度挺大,如果以上都没有问题,检查酶是否足量,好运
5楼2011-01-13 15:07:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 17:32:13
分别使用单酶切切一下,验证一下你的酶有没有问题。

下次同时加入未酶切的质粒作为对照。
6楼2011-01-13 16:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

May-133

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也出现了这种问题 请问你解决了吗?
7楼2016-03-11 10:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tanxi125 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +3 yuleib84 2026-08-25 4/200 2026-08-25 13:31 by zjjcn2001
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 +3 ziyangfang 2026-08-25 3/150 2026-08-25 13:14 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见