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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒双酶切，看图！
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tanxi125

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒双酶切，看图！ 已有6人参与

我是将我括的目的条带连在T载体上，目的片段1380bp左右。T载体用的是宝生物的PMD-18载体有2692bp。我用的是Ecor1和Hand3 两个酶切的。插入位点在这两个酶切位点之间，两个酶切位点相距六七十个bp，那么酶切后我的目的片段应该是1400左右。M分别是300bp.500bp.800bp.1000bp.1500bp.3000bp.剩下的是4000bp-10000bp。比较亮的条带是载体大概在3000bp下面，这样看起来应该没错。但是在1500bp-1000bp下面的条带特别弱，而且看起来也不到1400bp，不知道是不是我的目的条带！
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什么都得靠自己！我现在深刻理解！
1楼 2011-01-13 13:33:04
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-13 15:07:35
不大靠谱，载体条带那么亮，摩尔量一样，按道理，目的条带应该有载体亮度一半亮才对。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-01-13 14:15:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-13 15:07:50
这么弱，和最亮的不成比例，而且最前面怎么还有带呀？
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3楼2011-01-13 14:16:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-13 15:08:06
你这个marker怎么跑成这样了？楼主说的目的条带是可以看到，可是也太淡了点吧？
能不能做一个pcr验证一下呢？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-01-13 14:22:07
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2):good 2011-01-13 15:08:20
目的条带可能是正确的，说可能是你的Marker跑歪了，说正确是它确实在那个位置，但是亮度明显不够，是不是用的TAKARA的内切酶，是的话，检查一下这两种酶在你用的那种Buffer里面的活性，是不是有一个活性特别低，或者两个都很低？还有，酶切时间的问题，也要考虑，你的质粒浓度挺大，如果以上都没有问题，检查酶是否足量，好运
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5楼2011-01-13 15:07:00
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月月大可

木虫 (著名写手)
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 17:32:13
分别使用单酶切切一下，验证一下你的酶有没有问题。

下次同时加入未酶切的质粒作为对照。
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6楼2011-01-13 16:31:39
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May-133

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也出现了这种问题 请问你解决了吗？
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7楼2016-03-11 10:56:24
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