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索索00

铁虫 (小有名气)

[求助] 蓝斑和白斑都有带,为什么呢 急。

我现在的疑问是:我对我的对照组进行了质粒提取检测,发现篮板和白色菌落都有带还很亮,有图片,第一个是原来的质粒,后面四个是长得菌落,前面两个是蓝斑,后面是百菌落,按理说,用一个环状的质粒做转化的话,他不应该有带的,可是现在,,,,,什么原因,还请各位帮忙分析下,谢谢啦!
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索索00

铁虫 (小有名气)

索索00: 回帖置顶 2011-12-21 14:32:52
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-12-19 09:20:35:
用环状的质粒做转化不应该有带? 不是很明白什么意思。
楼主可以把整个实验说清楚一些,还有质粒是什么质粒,菌落PCR是怎么P的之类...

恩 好的:      我现在又重新做了,用为我的连接产物提了质粒,条带是有的,说明我的外源DNA转进去了,可是,为什么就是只长几个呢?这一次的从头到尾都是师兄一个人操作,他的长了有100百多,我的就只有几个,要疯掉了。不知道是哪出错了,步骤方法是没有问题的,别人都做出来了,我就不行。。。。哎。


7楼2011-12-21 14:32:42
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索索00

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by yuxia82012 at 2011-12-21 15:25:18:
你是在做克隆吗?如果是克隆的话就不要纠结别人长得多你的长得少,只要有一个对了就好,连接鉴定的话建议不要用PCR,一个快检,一个酶切鉴定就足够了

恩 我是在做克隆,可是我要建库,几个是绝对不行的,必须要最少要500多才行,那是最少的。
10楼2011-12-22 08:36:59
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普通回帖

longrna

新虫 (正式写手)

用环状的质粒做转化不应该有带? 不是很明白什么意思。
楼主可以把整个实验说清楚一些,还有质粒是什么质粒,菌落PCR是怎么P的之类...
伟大航线....
2楼2011-12-19 09:20:35
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜(金币+2): Good! 2011-12-22 18:27:18
PCR假阳性,所以单做PCR是不行的,还要酶切验证!
原因:1 可能是质粒并没有完全转化到细菌中去,而是吸附在表面。2 可能是细菌基因组内有引物结合位点
真相是最大的奢侈品
3楼2011-12-19 09:35:38
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-22 18:27:38
这是质粒图还是PCR结果?要是质粒图,你的蓝白斑都阴性,要是PCR鉴定的结果,还是对质粒双酶切看看吧,PCR鉴定的假阳性都很多,PCR结果不可信,可能是PCR污染导致的!
大家共同交流、共同提高!!!
4楼2011-12-19 18:35:02
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-22 18:28:03
你用的是特异引物吧,转化时质粒用量较高,质粒涂在平板上,PCR可以扩增30亿倍,也就是说你挑点培养基也可以P出带来。有两种办法:1,用载体通用引物P;2,用2ml管摇菌后再PCR。
生命不息,探索不止。
5楼2011-12-19 20:03:36
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我很奇怪为什么环状的质粒转化不应该有结果?而且是说提质粒没结果还是PCR没结果?
6楼2011-12-19 23:40:41
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索索00

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by piaoyunokok at 2011-12-19 23:40:41:
我很奇怪为什么环状的质粒转化不应该有结果?而且是说提质粒没结果还是PCR没结果?

PCR是有的,质粒也有呢。都有带,给你看下图片
8楼2011-12-21 14:33:48
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是在做克隆吗?如果是克隆的话就不要纠结别人长得多你的长得少,只要有一个对了就好,连接鉴定的话建议不要用PCR,一个快检,一个酶切鉴定就足够了
在等待中涅槃重生
9楼2011-12-21 15:25:18
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