| 查看: 3029 | 回复: 7 | |||
320080920001金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】蓝白斑筛选实验原理
|
|
我们要做DNA转化实验，但在预习时有几个问题，想请请教大家帮忙解答一下： 1、受体为大肠杆菌JM109，载体为质粒pUC19Vector. 请问质粒pUC19Vector上带有的β-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息是来自大肠杆菌吗？即这个质粒是人工构建的吗？ 2、JM109 宿主菌染色体上带有Lac Z的C端部分编码信息，质粒载体与Lac Z基因上缺失近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的大肠杆菌突变体之间的这种互补作用称为α-互补。 请问JM109没有β-半乳糖苷酶基因的操纵子序列，是如何起始表达的？ 3、我附了张PPT的图片，里面说α肽和c端部分由于α互补形成有活性的β-半乳糖苷酶，而α-肽中加了一段外源基因产物就无法和c端结合，不能互补。 问题是之所以不出现白斑而显示蓝斑不是因为只转进空质粒吗？这个外源基因从何而来？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 蓝白斑筛选卫星菌落问题
已经有23人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 蓝白斑筛选的问题
已经有5人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 蓝白斑筛选问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】分子克隆
已经有15人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有9人回复
- 【求助/交流】IPTG
已经有18人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有6人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选什么也不长
已经有16人回复
320080920001
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 940.7
- 散金: 105
- 红花: 1
- 帖子: 567
- 在线: 89.9小时
- 虫号: 1043714
- 注册: 2010-06-18
- 专业: 免疫生物学
2楼2010-10-28 20:09:32
3楼2010-10-28 20:14:07
4楼2010-10-28 20:15:19
320080920001(金币+1):这些在实验原理中都写得很清楚，我也相信我明白原理了，但是好像你没有看懂我写的第一个和第二个问题，这样粘贴的回答不济于事啊 2010-10-28 20:56:49
|
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。 现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。 |
5楼2010-10-28 20:47:19
320080920001
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 940.7
- 散金: 105
- 红花: 1
- 帖子: 567
- 在线: 89.9小时
- 虫号: 1043714
- 注册: 2010-06-18
- 专业: 免疫生物学
6楼2010-10-29 09:03:32
★ ★
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-10-29 11:53:43
320080920001(金币+4):请问大肠杆菌DH-5a是什么？JM109上有载体的启动子有文献证明吗？我需要写实验报告。 2010-10-30 19:40:25
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-10-29 11:53:43
320080920001(金币+4):请问大肠杆菌DH-5a是什么？JM109上有载体的启动子有文献证明吗？我需要写实验报告。 2010-10-30 19:40:25
|
1、受体为大肠杆菌JM109，载体为质粒pUC19Vector. 请问质粒pUC19Vector上带有的β-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息是来自大肠杆菌吗？即这个质粒是人工构建的吗？ 这个质粒是人工构建的，β-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息是来自大肠杆菌，但是作为宿主的大肠杆菌DH-5a并没有这段序列，因此可以实现a-互补。 2、JM109 宿主菌染色体上带有Lac Z的C端部分编码信息，质粒载体与Lac Z基因上缺失近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的大肠杆菌突变体之间的这种互补作用称为α-互补。 请问JM109没有β-半乳糖苷酶基因的操纵子序列，是如何起始表达的？ JM109上有载体的启动子，启动子会启动编码载体上携带的Lac Z的N端部分编码信息，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。 [ Last edited by xulanzzz on 2010-10-29 at 10:32 ] |
7楼2010-10-29 10:22:45
8楼2010-10-31 20:38:12
20