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320080920001

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选实验原理

我们要做DNA转化实验，但在预习时有几个问题，想请请教大家帮忙解答一下：
1、受体为大肠杆菌JM109，载体为质粒pUC19Vector.
请问质粒pUC19Vector上带有的β-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息是来自大肠杆菌吗？即这个质粒是人工构建的吗？
2、JM109 宿主菌染色体上带有Lac Z的C端部分编码信息，质粒载体与Lac Z基因上缺失近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的大肠杆菌突变体之间的这种互补作用称为α-互补。
请问JM109没有β-半乳糖苷酶基因的操纵子序列，是如何起始表达的？
3、我附了张PPT的图片，里面说α肽和c端部分由于α互补形成有活性的β-半乳糖苷酶，而α-肽中加了一段外源基因产物就无法和c端结合，不能互补。
问题是之所以不出现白斑而显示蓝斑不是因为只转进空质粒吗？这个外源基因从何而来？

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1楼 2010-10-28 08:03:53

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xulanzzz

金虫 (著名写手)

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★ ★
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-10-29 11:53:43
320080920001(金币+4):请问大肠杆菌DH-5a是什么？JM109上有载体的启动子有文献证明吗？我需要写实验报告。 2010-10-30 19:40:25

1、受体为大肠杆菌JM109，载体为质粒pUC19Vector.
请问质粒pUC19Vector上带有的β-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息是来自大肠杆菌吗？即这个质粒是人工构建的吗？
这个质粒是人工构建的，β-半乳糖苷酶基因（Lac Z）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息是来自大肠杆菌，但是作为宿主的大肠杆菌DH-5a并没有这段序列，因此可以实现a-互补。
2、JM109 宿主菌染色体上带有Lac Z的C端部分编码信息，质粒载体与Lac Z基因上缺失近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的大肠杆菌突变体之间的这种互补作用称为α-互补。
请问JM109没有β-半乳糖苷酶基因的操纵子序列，是如何起始表达的？
JM109上有载体的启动子，启动子会启动编码载体上携带的Lac Z的N端部分编码信息，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。

[ Last edited by xulanzzz on 2010-10-29 at 10:32 ]