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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】IPTG
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】IPTG 已有11人参与

在SDSPAGE凝胶电泳中，IPTG是诱导重组菌蛋白的表达，那IPTG在诱导过程中对菌生长有那些影响？
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1楼 2010-07-26 18:41:51
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你发的问题都好有深度不懂
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
2楼2010-07-26 19:12:14
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

百度百科~~

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5):good！ 2010-07-26 20:50:29
诱导原理： E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I（图15-4）。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激 活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表 达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结 合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷 酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一 种作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。

另外建议LZ回去多看看分子克隆实验指南之类的书。
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3楼2010-07-26 19:22:06
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花花贝

金虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-08 13:26:55
就记住他是诱导剂就可以了使用浓度在0.5mM 一般也做个梯度 诱导表达
其他的可作为兴趣看一下
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4楼2010-07-26 20:04:21
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2010-07-26 19:22:06:
诱导原理： E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I（图15-4）。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结 ...

简而言之： 就是IPTG存在的情况下，宿主菌不能正常表达自身的蛋白，而外源基因的蛋白可以表达是吗？
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5楼2010-07-27 08:34:31
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 花花贝 at 2010-07-26 20:04:21:
就记住他是诱导剂就可以了使用浓度在0.5mM 一般也做个梯度 诱导表达
其他的可作为兴趣看一下

6楼2010-07-27 08:35:45
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
但是浓度大了，也会影响生长的
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7楼2010-07-27 09:21:58
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wdyym

禁言 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):鼓励分享 2010-08-08 13:27:18
本帖内容被屏蔽
8楼2010-07-27 09:52:02
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)
蓝白斑帅选的时候也用IPTG来诱导
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9楼2010-07-27 09:52:24
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wdyym at 2010-07-27 09:52:02:
个人经验发现高浓度的IPTG影响大肠杆菌生长，若楼主只是为了验证蛋白是否表达，可以直接用3mM诱导，这个浓度下，一般达到饱和。若已经表达，为了找一个合适的浓度，楼主可以做一个诱导梯度，从而找到最佳诱导浓度

好主意！
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10楼2010-07-27 16:07:00
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