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yangjunzju

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】IPTG含量 已有4人参与

各位虫友:
              请教一个问题,我们做蛋白诱导表达时经常要用到IPTG诱导,但是当加入一定量的IPTG后,经过一段时间后我想知道IPTG是否会被菌体降解。如何确定IPTG在菌液中的含量呢?非常感谢
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


yangjunzju(金币+1):谢谢参与
肯定不会被降解。否则就不会选择IPTG作为诱导剂了。

我推荐楼主看下下面这个文献:是关于自诱导培养的。解决了本底表达的问题,表达量可以比IPTG诱导提高好几倍。主要改良的就是培养基,用这个培养基,就不需要在中途测OD,加诱导剂了。整个表达一步完成。好像也可以不加抗生素。作者是pET系统的发明者studier。
我自己做过,效果很好。有问题欢迎交流。
生物资源交流QQ群:1044518333
4楼2010-01-29 09:34:53
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普通回帖

85715623

木虫 (正式写手)

yangjunzju(金币+1):谢谢参与
yangjunzju(金币+1):一般情况是不降解,但是我们怀疑此菌有降解能力 2010-01-28 23:13
不会被降解,作用就是诱导蛋白表达。
2楼2010-01-28 22:00:52
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)


yangjunzju(金币+1):谢谢参与
应该不会吧,目前没有尝试做过此类测试
■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
3楼2010-01-29 09:25:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

yangjunzju(金币+2):非常感谢,哈哈,太详细了。。。学习了。。。 2010-01-29 12:44
另附一张我自己做的表达电泳图。
依次为未诱导、BL21 IPTG诱导-1、BL21 IPTG诱导-2、BL21 自诱导培养。
5ml小量诱导,直接取菌液(不离心,不浓缩)加buffer后上样电泳。
可以看出表达量自诱导要高不少。
生物资源交流QQ群:1044518333
5楼2010-01-29 09:38:15
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zier1011

木虫 (著名写手)


yangjunzju(金币+1):谢谢参与
楼主去百度一下IPTG是什么就知道了,IPTG可用作半乳糖苷酶的诱导物,它是其底物的类似物,却不被微生物代谢利用!
花还香香的
6楼2010-01-29 09:51:40
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zjwang

木虫 (正式写手)


yangjunzju(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-01-29 09:38:15:
另附一张我自己做的表达电泳图。
依次为未诱导、BL21 IPTG诱导-1、BL21 IPTG诱导-2、BL21 自诱导培养。
5ml小量诱导,直接取菌液(不离心,不浓缩)加buffer后上样电泳。
可以看出表达量自诱导要高不少。

什么是自诱导?
7楼2010-01-29 09:51:47
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qdwmq

木虫 (正式写手)


yangjunzju(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2010-01-29 09:51:47:

什么是自诱导?

利用细菌先利用葡萄糖后利用乳糖的特性,使蛋白“自动”表达的方法。
8楼2010-01-29 10:36:18
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


yangjunzju(金币+1):谢谢参与
发酵的时候,用IPTG诱导太过昂贵,乳糖在一定的程度上降低了成本,但乳糖也比较贵,不知道发酵的过程中,还有没有其他的诱导方法(除了温度)。
Thank-you,so-blue.
9楼2010-01-29 12:48:45
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yangjunzju

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-01-29 12:48:45:
发酵的时候,用IPTG诱导太过昂贵,乳糖在一定的程度上降低了成本,但乳糖也比较贵,不知道发酵的过程中,还有没有其他的诱导方法(除了温度)。

我也很想知道,欢迎各位指点,交流。。。
10楼2010-01-29 12:51:41
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