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xulanzzz

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】革兰氏阳性菌的破碎已有9人参与

大家好,我用IPTG诱导谷氨酸棒杆菌(革兰氏阳性菌),结果细胞破碎(溶菌酶37度处理30分钟,直接拿去超声破碎)之后蛋白电泳图无任何条带,估计是细胞破碎出了问题,请问有做过阳性菌破碎的吗,是如何进行破碎的?
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DOBEST
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tongyanna

金虫 (正式写手)

不好意思,我也不知道
自己的路,自己快乐的走
2楼2010-07-27 13:10:43
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dengxuepeng

金虫 (小有名气)

xulanzzz(金币+4): 2010-07-27 13:44:21
超声破碎后有很多内源性的蛋白酶也会释放出来,可能会将蛋白降解掉。但一般不会完全将蛋白降解掉,也就是说不可能电泳无任何条带,也可能超声太清,没有将细胞破碎。你可以用Bradford法或测A280测一下溶液有没有蛋白,含量多少?
在工作中享受生活。
3楼2010-07-27 13:16:04
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xulanzzz

金虫 (著名写手)

谢谢楼上
DOBEST
4楼2010-07-27 13:51:02
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xulanzzz

金虫 (著名写手)

发酵时间过长 菌体不容易裂解可能也是一个重要原因
DOBEST
5楼2010-07-27 13:57:30
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henkally

禁虫 (著名写手)


xulanzzz(金币+1):谢谢参与
xulanzzz(金币+4): 2010-07-27 14:26:05
xulanzzz(金币+3): 2010-08-08 11:30:55
本帖内容被屏蔽

6楼2010-07-27 14:04:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


xulanzzz(金币+1):谢谢参与
xulanzzz(金币+3): 2010-07-27 15:48:39
有降解也不会所有蛋白都降解了吧。
会不会是菌体量不够,蛋白含量太低,PAGE根本看不出来,
制样前最好测下蛋白含量。
Thank-you,so-blue.
7楼2010-07-27 14:53:06
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xiulingshang

铁虫 (小有名气)

细胞裂解不充分
其实今年就两件事,毕业+工作
8楼2011-10-12 16:45:51
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dxli1988

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
837245楼: Originally posted by xulanzzz at 2010-07-27 13:51:02
谢谢楼上

请问你IPTG诱导的终浓度是多少啊?
逆水行舟,不进则退。
9楼2012-05-25 22:10:05
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tianyang1990

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同求教。我现在也遇到了同样的问题,不知道你可否把方法给讲一下。万分感谢。
10楼2014-03-26 16:27:35
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