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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】革兰氏阳性菌的破碎
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xulanzzz

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】革兰氏阳性菌的破碎 已有9人参与

大家好，我用IPTG诱导谷氨酸棒杆菌（革兰氏阳性菌），结果细胞破碎（溶菌酶37度处理30分钟，直接拿去超声破碎）之后蛋白电泳图无任何条带，估计是细胞破碎出了问题，请问有做过阳性菌破碎的吗，是如何进行破碎的？
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DOBEST
1楼 2010-07-27 12:30:56
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tongyanna

金虫 (正式写手)
不好意思，我也不知道
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自己的路，自己快乐的走
2楼2010-07-27 13:10:43
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dengxuepeng

金虫 (小有名气)
xulanzzz(金币+4): 2010-07-27 13:44:21
超声破碎后有很多内源性的蛋白酶也会释放出来，可能会将蛋白降解掉。但一般不会完全将蛋白降解掉，也就是说不可能电泳无任何条带，也可能超声太清，没有将细胞破碎。你可以用Bradford法或测A280测一下溶液有没有蛋白，含量多少？
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在工作中享受生活。
3楼2010-07-27 13:16:04
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xulanzzz

金虫 (著名写手)
谢谢楼上
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DOBEST
4楼2010-07-27 13:51:02
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xulanzzz

金虫 (著名写手)
发酵时间过长 菌体不容易裂解可能也是一个重要原因
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DOBEST
5楼2010-07-27 13:57:30
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henkally

禁虫 (著名写手)
★
xulanzzz(金币+1):谢谢参与
xulanzzz(金币+4): 2010-07-27 14:26:05
xulanzzz(金币+3): 2010-08-08 11:30:55
本帖内容被屏蔽
6楼2010-07-27 14:04:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
xulanzzz(金币+1):谢谢参与
xulanzzz(金币+3): 2010-07-27 15:48:39
有降解也不会所有蛋白都降解了吧。
会不会是菌体量不够，蛋白含量太低，PAGE根本看不出来，
制样前最好测下蛋白含量。
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Thank-you，so-blue.
7楼2010-07-27 14:53:06
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xiulingshang

铁虫 (小有名气)
细胞裂解不充分
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其实今年就两件事,毕业+工作
8楼2011-10-12 16:45:51
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dxli1988

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
837245楼: Originally posted by xulanzzz at 2010-07-27 13:51:02
谢谢楼上

请问你IPTG诱导的终浓度是多少啊？
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逆水行舟，不进则退。
9楼2012-05-25 22:10:05
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tianyang1990

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同求教。我现在也遇到了同样的问题，不知道你可否把方法给讲一下。万分感谢。
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10楼2014-03-26 16:27:35
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