3楼: Originally posted by hippo_li at 2012-11-12 09:36:42
我们提基因组的时候通常在加入蛋白酶处理半小时后，加入终浓度为1-2%的SDS再处理1小时。

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-12 02:38:37
你做的是什么菌？可能是对溶菌酶不敏感，看适当增加溶菌酶处理时间。此外，溶菌酶处理后最好加入含有一定量的SDS裂解液使细胞破碎更完全。破碎后的菌液比破碎前要透明，溶液变粘稠。

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-12 02:38:37
你做的是什么菌？可能是对溶菌酶不敏感，看适当增加溶菌酶处理时间。此外，溶菌酶处理后最好加入含有一定量的SDS裂解液使细胞破碎更完全。破碎后的菌液比破碎前要透明，溶液变粘稠。

6楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-12 13:27:58
这个菌我上学期也做过，提出来了，只是跑电泳发现有些降解，所以想再提一次。我是用溶菌酶，蛋白酶K处理后，用异丙醇析出DNA，再用酚，氯仿抽提。可是最近连着做了三次，都没有做出来。三次的现象是这样的：
第一 ...

4楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-12 13:25:24
你们的体系大概是多大，用多少菌体提的？
我是这样做的：离心1.5ml的菌体，180ul溶菌酶（20mg/ml)处理40——60min（37℃），再用蛋白酶K处理30min（65℃）。后面就是用异丙醇沉淀，酚氯仿抽提两次，无水乙醇沉淀， ...

9楼: Originally posted by hippo_li at 2012-11-13 16:44:25
不知道你做的是什么菌，是革兰氏阳性菌吗？我提的是放线菌，如果是提基因组来建库，通常是大体积的提，50 mL培养液的菌体，如果只是检测用，体积就很小，提取方法也有不同。...