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有关基因组提取问题
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我现在用自己配制的试剂提基因组来构建基因文库。提取的大致流程是： 1、用20mg/ml的溶菌酶37℃处理一小时。 2.、再用蛋白酶K处理半小时。 3、然后加异丙醇析出基因组，一般在这一步就会出现丝状物，再用枪头挑出。 4、晾干，用TE溶解，再用酚氯仿抽提两次。 5、用冷的无水乙醇沉淀。 6/70%的乙醇洗一次 8、TE保存。 问题是，在用异丙醇析出的这一步，并没有丝状物出现，而是溶液变浑浊而已，所以就没有用枪头挑，直接离心取沉淀，但越往后做，根本没有沉淀，在用冷的无水乙醇沉淀这一步根本没有沉淀出现，已经提了三次了，都是这个显现，请问哪位大侠能帮忙分析一下是哪里出问题了？谢谢~~~ |
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这个菌我上学期也做过，提出来了，只是跑电泳发现有些降解，所以想再提一次。我是用溶菌酶，蛋白酶K处理后，用异丙醇析出DNA，再用酚，氯仿抽提。可是最近连着做了三次，都没有做出来。三次的现象是这样的： 第一次：取4ml菌，在蛋白酶K处理后，离心，取上清，可是沉淀是很粘稠的一坨，吸不上来；最后在加入异丙醇后，没有丝状物出现（上次是有丝状物出现）。怀疑菌量太多。 第二次“取1.5ml菌，蛋白酶K处理后，溶液离心，一点都不粘稠，很容易就把上清分离出来，但是加入异丙醇后还是没有丝状物出现，只是变浑浊了，直到最后一步，也没有沉淀出现。 我一直怀疑是在溶菌酶处理，蛋白酶K处理时有问题，但都是按之前的步骤来的，怎么也提不出来。 |
6楼2012-11-12 13:27:58
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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2楼2012-11-12 02:38:37
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