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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 反转录RNA时出现基因组DNA的原因有哪些？
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dsjyd

金虫 (著名写手)

[求助] 反转录RNA时出现基因组DNA的原因有哪些？ 已有6人参与

问题如题目的，老师只说提取不彻底的，可是那些方面会造成提取不彻底呢？老师当时解释的也不是很理解的，希望有智者可以帮忙解答一下的，谢了

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
1楼 2014-05-15 23:27:16
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难得糊涂gtt

新虫 (初入文坛)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-05-16 11:45:12
提取RNA时应该加入Dnase I在37度消化DNA
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3楼2014-05-16 08:52:21
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普通回帖

dsjyd

金虫 (著名写手)
忘说了，是cDNA在琼脂凝胶电泳时出现了基因组DNA

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
2楼2014-05-15 23:57:14
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dsjyd

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 难得糊涂gtt at 2014-05-16 08:52:21
提取RNA时应该加入Dnase I在37度消化DNA

我们根据老师给的实验步骤做的，好像没有加Dnase，进行电泳时出现了基因组DNA,问老师原因也没说出所以然来，只说提取不完全，可是在操作步骤上有哪些方面会造成呢？

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
4楼2014-05-17 23:19:06
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cai3110274

木虫 (职业作家)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:24:15
个人感觉最重要的步骤是加氯仿后一定要混匀， 后面吸取上清的时候一定不要贪多而吸到其他液层，希望楼主实验早日顺利
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夫天地者万物之逆旅
5楼2014-05-19 07:57:25
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wangy0908

金虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:24:24
本来抽提RNA的试剂就能抽提出DNA来。现在市场上买的任何一个RNA抽提试剂盒都是这样的，只是有的试剂盒在里面就直接加入了DNA消化酶，所以抽提出来就没有DNA,一般的试剂盒都要进行DNA消化才鞥得到纯的RNA。最主要的产生DNA的地方，就是氯仿萃取哪一步！
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6楼2014-05-19 08:42:25
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OmicsLink

银虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by dsjyd at 2014-05-17 23:19:06
我们根据老师给的实验步骤做的，好像没有加Dnase，进行电泳时出现了基因组DNA,问老师原因也没说出所以然来，只说提取不完全，可是在操作步骤上有哪些方面会造成呢？
...

不经过Dnase I消化的话肯定就会有gDNA残留。得先确保你们用的试剂里是否包含这个成分。操作步骤上，进行DNase I 消化后，是直接进行反转录或是再重新纯化就要仔细阅读说明书。并且，要确保试剂没有被污染。推荐All-in-One™ First-Strand cDNA Synthesis Kit.
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一切有为法，如露如闪电
7楼2014-05-19 11:18:08
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大爷给跪了

新虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-19 20:24:35
ls有人说的对，市场上任何一种提取试剂盒其实都没办法说完全去除dna。第一：或者本就含有dna酶，那样肯定可以去吃dna，第二：有的提取液是提取离心后是分层的，每一层的东西都不一样，所以ls说的不贪多是对的——贪多嚼不烂。

和沉淀其实也有关系。我记得有的试剂比如licl就可以专门沉淀rna不沉淀dna，这也是一个去除rna中dna的方法。我基本是在rna中加dna酶。

总之，要在试验操作中多摸索，对原理要多了解。
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8楼2014-05-19 11:47:26
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dsjyd

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cai3110274 at 2014-05-19 07:57:25
个人感觉最重要的步骤是加氯仿后一定要混匀， 后面吸取上清的时候一定不要贪多而吸到其他液层，希望楼主实验早日顺利

谢谢哈！我的感觉也是如此的。。。谢了

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
9楼2014-05-22 12:19:15
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dsjyd

金虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 大爷给跪了 at 2014-05-19 11:47:26
ls有人说的对，市场上任何一种提取试剂盒其实都没办法说完全去除dna。第一：或者本就含有dna酶，那样肯定可以去吃dna，第二：有的提取液是提取离心后是分层的，每一层的东西都不一样，所以ls说的不贪多是对的——贪 ...

嗯嗯，谢了哈

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
10楼2014-05-22 12:20:17
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