24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 6271  |  回复: 6

070250035

银虫 (小有名气)

[求助] 反转录后用cDNA做模板扩不出目的基因怎么办???

各位大侠急急求助啊!

       最近小女子做分子实验颇为不顺!扩出来一个1800多的CDS全长,之后提RNA反转录后用CDNA当模板扩增,咋扩都得不到目的片段,程序和之前扩基因组的是一样的,但是之前一直是好好的很漂亮的带,只是LATaq酶扩的时候会出现一条弱的500bp左右片段,现在反转录后可以得到这个非特异的500bp片段,就是没有1800多的,提高退火温度也不行,提高1度后就什么带都没了!折磨死我了!
   
       求神人帮助!万分感谢!
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 2012-12-15.bmp
  • 2013-01-15 16:54:41, 1.69 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

探究知识的海洋
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-18 08:08:46
可能这个基因在你提取RNA所用的组织中不表达,查一下这个基因表达最高的那个组织(或者多尝试几个组织),然后提取这个组织中的RNA进行,反转录,作为模板,进行扩增。
再就是buffer建议用GC-rich buffer,
如果这个还不行的话,可以尝试嵌套式PCR
祝你好运!
2楼2013-01-16 08:52:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

070250035

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yesali at 2013-01-16 08:52:31
可能这个基因在你提取RNA所用的组织中不表达,查一下这个基因表达最高的那个组织(或者多尝试几个组织),然后提取这个组织中的RNA进行,反转录,作为模板,进行扩增。
再就是buffer建议用GC-rich buffer,
如果这 ...

在叶片和根都有表达,现在重新反转录,扩出的有接近2000的弱带,切胶回收后再扩却跑出三条很接近的带,都在1500以上,没法判断你哪个是目的序列咋办??而且很近,切的话,区分不开!
探究知识的海洋
3楼2013-01-17 18:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)

想问一下,你扩出来的CDS是以DNA为模板还是以RNA为模板啊
4楼2013-01-17 21:08:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

科研屌丝007

新虫 (小有名气)

楼主 你的1800bpCDS序列是从基因组中扩增得到的吧,而你现在以cDNA为模板,那肯定有内含子的影响啊,重新设计引物吧
5楼2013-01-19 22:34:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果从基因组直接扩增会有内含子影响。另外,如果GC含量太高也容易丢失片段
Followyourheart!
6楼2013-01-20 00:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丹丹317

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


070250035(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:12:29
是不是模板出现了问题 ,可以重新提RNA然后再反转录成cDAN试试呢,其实这个挺长的,
fighting
7楼2013-07-22 18:46:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 070250035 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 295求调剂 +10 xndjjj 2026-04-04 10/500 2026-04-05 11:19 by 猪会飞
[考研] 化学调剂 +13 艾志恒 2026-04-03 14/700 2026-04-05 10:59 by 风雨无晴
[考研] 材料调剂 +9 革微桂 2026-04-04 9/450 2026-04-05 08:27 by 544594351
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
[考研] 292分,材料与化工,申请调剂 +22 程晴之 2026-04-01 26/1300 2026-04-04 22:03 by hemengdong
[考研] 342求调剂 +3 Liang7111 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:47 by dongzh2009
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 085600专硕材料与化工348分求调剂 +10 上学啦! 2026-04-01 11/550 2026-04-03 14:13 by 百灵童888
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 319求调剂 +18 太容易1018 2026-04-01 18/900 2026-04-03 11:18 by linyelide
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 10/500 2026-04-03 11:08 by Kittylucky
[考研] 复试调剂 +3 bvzz 2026-04-01 3/150 2026-04-03 09:47 by 蓝云思雨
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
[考研] 求调剂求调剂 +7 121. 2026-04-02 7/350 2026-04-02 19:15 by dick_runner
[考研] 275学硕081000服从调剂到其他专业,保不住本专业了 +7 一只小小水牛 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:23 by alice-2022
信息提示
请填处理意见