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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来
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szylnl

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来

我最近在做RT-PCR。总RNA提的挺好的，但反转录怎么也做不出来，怀疑是不是cDNA没有反转录成功，怎么才能检测出来呢？跑电泳看不到啊，谢谢各位大侠了！！！
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1楼2011-03-24 14:32:03
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hyw1989960

木虫 (正式写手)
szylnl(金币+1): 2011-04-25 16:20:23
你可以用你反转录的cDNA扩一下一些参照基因，比如18s什么的，不用扩的太多500bp左右就行，这些基因表达很稳定
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2楼2011-03-24 15:50:09
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
pcr 扩个内参
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4楼2011-03-24 15:54:32
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genewind

金虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 20:00:03
szylnl(金币+1): 2011-03-25 08:27:26
PCR扩内参，如果是随机引物做为引物进行的逆转录，使用18S做内参比较好，如果是Oligo为引物进行的逆转录，使用Actin，Ubquetin等比较好，这些基因基本都是持家基因，拷贝数比较多，很容易扩出。如果扩不出来，那有可能就是RNA里面含有抑制逆转录的成分，建议过一下RNA纯化柱。
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5楼2011-03-24 17:36:02
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
你就做一个内参基因的**普通**PCR就可以了，然后跑胶看看有没有条带即可。
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6楼2011-03-24 18:12:36
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vickie20

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
1075362楼: Originally posted by genewind at 2011-03-24 17:36:02:
PCR扩内参，如果是随机引物做为引物进行的逆转录，使用18S做内参比较好，如果是Oligo为引物进行的逆转录，使用Actin，Ubquetin等比较好，这些基因基本都是持家基因，拷贝数比较多，很容易扩出。如果扩不出来，那有 ...

那用自己设计的引物来反转录呢？跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧？
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7楼2012-05-18 16:59:17
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ncaty

银虫 (小有名气)
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1356796楼: Originally posted by vickie20 at 2012-05-18 16:59:17:
那用自己设计的引物来反转录呢？跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧？

不会吧?!你用自己设计出来的引物反转录? 我们反转录的时候通常都用random primer, 然后用内参(如β-actin,HPRT等)验证反转录的cDNA, 如果木有条带说明不成功啦.
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8楼2012-05-18 23:30:42
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vickie20

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
1356813楼: Originally posted by ncaty at 2012-05-18 23:30:42:
不会吧?!你用自己设计出来的引物反转录? 我们反转录的时候通常都用random primer, 然后用内参(如β-actin,HPRT等)验证反转录的cDNA, 如果木有条带说明不成功啦.

反转录可以用oligo（dt）primer、random primer还有specific primer啊，不是吗？
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9楼2012-05-19 10:35:34
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Sunshineboy

银虫 (小有名气)
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用A3或PRL-3检测
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10楼2014-06-28 17:45:02
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zgb19823楼
2011-03-24 15:50   回复  
PCR
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