24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4610  |  回复: 9

szylnl

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来

我最近在做RT-PCR。总RNA提的挺好的,但反转录怎么也做不出来,怀疑是不是cDNA没有反转录成功,怎么才能检测出来呢?跑电泳看不到啊,谢谢各位大侠了!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)


szylnl(金币+1): 2011-04-25 16:20:23
你可以用你反转录的cDNA扩一下一些参照基因,比如18s什么的,不用扩的太多500bp左右就行,这些基因表达很稳定
2楼2011-03-24 15:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
pcr 扩个内参
4楼2011-03-24 15:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genewind

金虫 (小有名气)


★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 20:00:03
szylnl(金币+1): 2011-03-25 08:27:26
PCR扩内参,如果是随机引物做为引物进行的逆转录,使用18S做内参比较好,如果是Oligo为引物进行的逆转录,使用Actin,Ubquetin等比较好,这些基因基本都是持家基因,拷贝数比较多,很容易扩出。如果扩不出来,那有可能就是RNA里面含有抑制逆转录的成分,建议过一下RNA纯化柱。
5楼2011-03-24 17:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
你就做一个内参基因的**普通**PCR就可以了,然后跑胶看看有没有条带即可。
6楼2011-03-24 18:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickie20

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1075362楼: Originally posted by genewind at 2011-03-24 17:36:02:
PCR扩内参,如果是随机引物做为引物进行的逆转录,使用18S做内参比较好,如果是Oligo为引物进行的逆转录,使用Actin,Ubquetin等比较好,这些基因基本都是持家基因,拷贝数比较多,很容易扩出。如果扩不出来,那有 ...

那用自己设计的引物来反转录呢?跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧?
7楼2012-05-18 16:59:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ncaty

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1356796楼: Originally posted by vickie20 at 2012-05-18 16:59:17:
那用自己设计的引物来反转录呢?跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧?

不会吧?!你用自己设计出来的引物反转录? 我们反转录的时候通常都用random primer, 然后用内参(如β-actin,HPRT等)验证反转录的cDNA, 如果木有条带说明不成功啦.
8楼2012-05-18 23:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickie20

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1356813楼: Originally posted by ncaty at 2012-05-18 23:30:42:
不会吧?!你用自己设计出来的引物反转录? 我们反转录的时候通常都用random primer, 然后用内参(如β-actin,HPRT等)验证反转录的cDNA, 如果木有条带说明不成功啦.

反转录可以用oligo(dt)primer、random primer还有specific primer啊,不是吗?
9楼2012-05-19 10:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshineboy

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用A3或PRL-3检测
10楼2014-06-28 17:45:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zgb19823楼
2011-03-24 15:50   回复  
PCR
相关版块跳转 我要订阅楼主 szylnl 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学070300 求调剂 +29 哈哈哈^_^ 2026-04-12 29/1450 2026-04-18 15:56 by Equinoxhua
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-16 11/550 2026-04-17 22:34 by chixmc
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
信息提示
请填处理意见