应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来
101/1返回列表
查看: 5060  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

szylnl

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来

我最近在做RT-PCR。总RNA提的挺好的，但反转录怎么也做不出来，怀疑是不是cDNA没有反转录成功，怎么才能检测出来呢？跑电泳看不到啊，谢谢各位大侠了！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-03-24 14:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)
szylnl(金币+1): 2011-04-25 16:20:23
你可以用你反转录的cDNA扩一下一些参照基因，比如18s什么的，不用扩的太多500bp左右就行，这些基因表达很稳定
赞一下 回复此楼
2楼2011-03-24 15:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
pcr 扩个内参
回复此楼
4楼2011-03-24 15:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genewind

金虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 20:00:03
szylnl(金币+1): 2011-03-25 08:27:26
PCR扩内参，如果是随机引物做为引物进行的逆转录，使用18S做内参比较好，如果是Oligo为引物进行的逆转录，使用Actin，Ubquetin等比较好，这些基因基本都是持家基因，拷贝数比较多，很容易扩出。如果扩不出来，那有可能就是RNA里面含有抑制逆转录的成分，建议过一下RNA纯化柱。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-03-24 17:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
你就做一个内参基因的**普通**PCR就可以了，然后跑胶看看有没有条带即可。
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-24 18:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickie20

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1075362楼: Originally posted by genewind at 2011-03-24 17:36:02:
PCR扩内参，如果是随机引物做为引物进行的逆转录，使用18S做内参比较好，如果是Oligo为引物进行的逆转录，使用Actin，Ubquetin等比较好，这些基因基本都是持家基因，拷贝数比较多，很容易扩出。如果扩不出来，那有 ...

那用自己设计的引物来反转录呢？跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧？
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-18 16:59:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ncaty

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1356796楼: Originally posted by vickie20 at 2012-05-18 16:59:17:
那用自己设计的引物来反转录呢？跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧？

不会吧?!你用自己设计出来的引物反转录? 我们反转录的时候通常都用random primer, 然后用内参(如β-actin,HPRT等)验证反转录的cDNA, 如果木有条带说明不成功啦.
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-18 23:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickie20

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1356813楼: Originally posted by ncaty at 2012-05-18 23:30:42:
不会吧?!你用自己设计出来的引物反转录? 我们反转录的时候通常都用random primer, 然后用内参(如β-actin,HPRT等)验证反转录的cDNA, 如果木有条带说明不成功啦.

反转录可以用oligo（dt）primer、random primer还有specific primer啊，不是吗？
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-19 10:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshineboy

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用A3或PRL-3检测
赞一下 回复此楼
10楼2014-06-28 17:45:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zgb19823楼
2011-03-24 15:50   回复  
PCR
相关版块跳转 我要订阅楼主 szylnl 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭