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汕头大学海洋科学接受调剂
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szylnl

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】总RNA反转录出的cDNA 怎样检测出来

我最近在做RT-PCR。总RNA提的挺好的,但反转录怎么也做不出来,怀疑是不是cDNA没有反转录成功,怎么才能检测出来呢?跑电泳看不到啊,谢谢各位大侠了!!!
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你就做一个内参基因的**普通**PCR就可以了,然后跑胶看看有没有条带即可。
6楼2011-03-24 18:12:36
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hyw1989960

木虫 (正式写手)


szylnl(金币+1): 2011-04-25 16:20:23
你可以用你反转录的cDNA扩一下一些参照基因,比如18s什么的,不用扩的太多500bp左右就行,这些基因表达很稳定
2楼2011-03-24 15:50:09
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genewind

金虫 (小有名气)


★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 20:00:03
szylnl(金币+1): 2011-03-25 08:27:26
PCR扩内参,如果是随机引物做为引物进行的逆转录,使用18S做内参比较好,如果是Oligo为引物进行的逆转录,使用Actin,Ubquetin等比较好,这些基因基本都是持家基因,拷贝数比较多,很容易扩出。如果扩不出来,那有可能就是RNA里面含有抑制逆转录的成分,建议过一下RNA纯化柱。
5楼2011-03-24 17:36:02
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vickie20

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1075362楼: Originally posted by genewind at 2011-03-24 17:36:02:
PCR扩内参,如果是随机引物做为引物进行的逆转录,使用18S做内参比较好,如果是Oligo为引物进行的逆转录,使用Actin,Ubquetin等比较好,这些基因基本都是持家基因,拷贝数比较多,很容易扩出。如果扩不出来,那有 ...

那用自己设计的引物来反转录呢?跑PCR 应该也是用自己设计的引物吧?
7楼2012-05-18 16:59:17
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