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tongchuan

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图,急!做了7.8次还是这样。已有8人参与

各位大家好,大家帮我看下下面的这张电泳图

用了有以前师兄做过的内参GAPDH,引物合成也一样。片段也就200多。条件什么的都一样,只是他做的是脑,我做的是肠管,我的一直是上面的结果,用的百分之1.5的TBE。师兄的图片做的很漂亮,还两对其它的基因,片段一个是400,一个是700。最好结果都是这样。
我提的RNA结果电泳很好,反转录一般也不会出什么问题吧,pCR按照师兄的条件也做不出来。
各位大哥大姐,帮忙分析下原因,定重谢。。。Sample TextSample TextSample Text
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
=v=不明白你的问题在哪里
2楼2010-10-02 15:27:16
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-10-03 03:23:08
如果说前边都很好,很有可能就是反转的问题,建议跑个反转产物看看
3楼2010-10-02 15:41:39
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阿娇

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物二聚体好亮,引物和酶是不是加太多了?
4楼2010-10-03 08:56:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼上,marker都不知道是毛何以推断为dimer
5楼2010-10-03 09:27:18
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tongchuan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-10-02 15:41:39:
如果说前边都很好,很有可能就是反转的问题,建议跑个反转产物看看

谢谢你的建议,我晚会做个CDNA电泳,看结果怎么样?
6楼2010-10-03 13:52:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

做cDNA电泳?such a bad idea
跑出来就是一smear,有神马好判断好坏的
倘若cDNA浓度不高,分分钟跑出来神马都看不见
7楼2010-10-03 23:08:41
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holylord

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):辛苦~ 2010-10-06 13:18:58
图片做的很糟糕,点样空都看不见,也不好判断。看你国庆还在发帖,呵呵,回复你。建议:
1、确定肠组织的RNA提取没有问题(电泳检测)
2、反转不要出错。
3、以别人论文(外文较佳)公布的内参引物和条件,用你的cdna跑pcr。
4、以你师兄的cdna为模板,内参GAPDH引物,跑pcr。
5、以你师兄的cdna为模板,你的引物跑pcr。
6、以你的引物和你的cdna模板跑pcr。
7、电泳,点样。顺序M33445566.
8、分析图片,你就会知道问题出在哪里了。
8楼2010-10-03 23:33:16
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)


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模板不纯,引物过多等引起的
奇怪的是你的DNA都超过了Marker
倚楼听风雨,淡看江湖路!
9楼2010-10-05 10:19:18
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tongchuan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by holylord at 2010-10-03 23:33:16:
图片做的很糟糕,点样空都看不见,也不好判断。看你国庆还在发帖,呵呵,回复你。建议:
1、确定肠组织的RNA提取没有问题(电泳检测)
2、反转不要出错。
3、以别人论文(外文较佳)公布的内参引物和条件,用你 ...

谢谢你给这么多建议,我用的就是好外文里的GAPDH引物。跑的rna电泳很好三条带,反转录只有三条带,和网上讨论的不太一样。我现在重新取材,怀疑是肠管里含的酶太多,MRNA降解了。
10楼2010-10-05 12:28:13
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