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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图，急！做了7.8次还是这样。
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tongchuan

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图，急！做了7.8次还是这样。 已有8人参与

各位大家好，大家帮我看下下面的这张电泳图

用了有以前师兄做过的内参GAPDH，引物合成也一样。片段也就200多。条件什么的都一样，只是他做的是脑，我做的是肠管，我的一直是上面的结果，用的百分之1.5的TBE。师兄的图片做的很漂亮，还两对其它的基因，片段一个是400，一个是700。最好结果都是这样。
我提的RNA结果电泳很好，反转录一般也不会出什么问题吧，pCR按照师兄的条件也做不出来。
各位大哥大姐，帮忙分析下原因，定重谢。。。Sample TextSample TextSample Text
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1楼 2010-10-02 15:23:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
=v=不明白你的问题在哪里
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2楼2010-10-02 15:27:16
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-10-03 03:23:08
如果说前边都很好，很有可能就是反转的问题，建议跑个反转产物看看
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3楼2010-10-02 15:41:39
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阿娇

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物二聚体好亮，引物和酶是不是加太多了？
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4楼2010-10-03 08:56:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼上，marker都不知道是毛何以推断为dimer
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5楼2010-10-03 09:27:18
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tongchuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lhwei1987 at 2010-10-02 15:41:39:
如果说前边都很好，很有可能就是反转的问题，建议跑个反转产物看看

谢谢你的建议，我晚会做个CDNA电泳，看结果怎么样？
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6楼2010-10-03 13:52:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
做cDNA电泳？such a bad idea
跑出来就是一smear，有神马好判断好坏的
倘若cDNA浓度不高，分分钟跑出来神马都看不见
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7楼2010-10-03 23:08:41
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holylord

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):辛苦~ 2010-10-06 13:18:58
图片做的很糟糕，点样空都看不见，也不好判断。看你国庆还在发帖，呵呵，回复你。建议：
1、确定肠组织的RNA提取没有问题（电泳检测）
2、反转不要出错。
3、以别人论文（外文较佳）公布的内参引物和条件，用你的cdna跑pcr。
4、以你师兄的cdna为模板，内参GAPDH引物，跑pcr。
5、以你师兄的cdna为模板，你的引物跑pcr。
6、以你的引物和你的cdna模板跑pcr。
7、电泳，点样。顺序M33445566.
8、分析图片，你就会知道问题出在哪里了。
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8楼2010-10-03 23:33:16
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板不纯，引物过多等引起的
奇怪的是你的DNA都超过了Marker
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
9楼2010-10-05 10:19:18
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tongchuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by holylord at 2010-10-03 23:33:16:
图片做的很糟糕，点样空都看不见，也不好判断。看你国庆还在发帖，呵呵，回复你。建议：
1、确定肠组织的RNA提取没有问题（电泳检测）
2、反转不要出错。
3、以别人论文（外文较佳）公布的内参引物和条件，用你 ...

谢谢你给这么多建议，我用的就是好外文里的GAPDH引物。跑的rna电泳很好三条带，反转录只有三条带，和网上讨论的不太一样。我现在重新取材，怀疑是肠管里含的酶太多，MRNA降解了。
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10楼2010-10-05 12:28:13
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