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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)

[交流] 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！

荧光定量PCR标准品的问题
我自己用质粒做的标准品，可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办，还有标准品在4度好，还是-20好，如果4度能保存多长时间
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1楼2011-12-14 12:10:40
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skywalkerelf

银虫 (小有名气)
★
yzhlasiI(金币+1):谢谢参与
短期4度，长期-20度，4度1周吧！
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2楼2011-12-16 11:33:45
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by skywalkerelf at 2011-12-16 11:33:45:
短期4度，长期-20度，4度1周吧！

做标准品的时候，两个质粒都测OD值了，因为我最后要计算同一样本两个基因的值的比，如果二者扩增效率不一致，怎么进行计算啊。我现在做的其中一个基因在10 8 copies/ul的时候CT值在8左右，斜率是2.9-3左右，而另一基因同等浓度的时候CT值在10左右，斜率是3.3-3.5，已经做过两次了，都是这样，这是什么原因呢？
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3楼2011-12-20 11:14:03
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adslye

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1.CT值变化的具体值差别有多大，是同次实验中平行管间的差别大还是不同次实验的数据差别大？
CT值肯定是在一个范围内波动的，基于PCR的定量的先天不足，没办法保证每次实验的添加的比例完全一致。
质粒的话啊，4度1个月无压力，尽快做吧，反复冻融对质粒其实影响也不大，但最好不要反复冻融。微观的东西不好说。
2.扩增效率不一样可以用各机器配套的软件进行矫正，AB的机子就有这个功能，实在不行应该也能去找原始文献，以前看过的，现在忘了。我比较倾向用仪器自带的，比较方便。

祝顺利
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4楼2011-12-20 14:01:08
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