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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)


[交流] 做了几次PCR CT值都有变化怎么办?谢谢大家!!

荧光定量PCR标准品的问题
我自己用质粒做的标准品,可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办,还有标准品在4度好,还是-20好,如果4度能保存多长时间
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skywalkerelf

银虫 (小有名气)



yzhlasiI(金币+1):谢谢参与
短期4度,长期-20度,4度1周吧!
2楼2011-12-16 11:33:45
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by skywalkerelf at 2011-12-16 11:33:45:
短期4度,长期-20度,4度1周吧!

做标准品的时候,两个质粒都测OD值了,因为我最后要计算同一样本两个基因的值的比,如果二者扩增效率不一致,怎么进行计算啊。我现在做的其中一个基因在10 8 copies/ul的时候CT值在8左右,斜率是2.9-3左右,而另一基因同等浓度的时候CT值在10左右,斜率是3.3-3.5,已经做过两次了,都是这样,这是什么原因呢?
3楼2011-12-20 11:14:03
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银虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1.CT值变化的具体值差别有多大,是同次实验中平行管间的差别大还是不同次实验的数据差别大?
CT值肯定是在一个范围内波动的,基于PCR的定量的先天不足,没办法保证每次实验的添加的比例完全一致。
质粒的话啊,4度1个月无压力,尽快做吧,反复冻融对质粒其实影响也不大,但最好不要反复冻融。微观的东西不好说。
2.扩增效率不一样可以用各机器配套的软件进行矫正,AB的机子就有这个功能,实在不行应该也能去找原始文献,以前看过的,现在忘了。我比较倾向用仪器自带的,比较方便。

祝顺利
4楼2011-12-20 14:01:08
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