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hubeilj1108

铁虫 (初入文坛)


[交流] 我们做荧光定量CT值有一个阈值线,这个阈值线可以手动调吗?

我们做荧光定量CT值有一个阈值线,这个阈值线可以手动调吗?相同的基因我们需要把阈值线调到一个一个标准吗?那么这样手动调以后那么多板都要调的话会不会很麻烦,我想问那个机器自动生成的阈值线会不会相同的基因都是一个值
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hubeilj1108(金币+1): 2011-04-26 19:09:02
dhd997(金币+5): good 2011-04-26 19:29:09
1.阈值线可以手动调的,只要是在指数扩增期就可以了,不会影响最后的结果。
2.阈值线不是针对某一个基因,是针对“同一次PCR”里面的所有样品、所有基因,并不是“相同的基因阈值线都一样”哦。不同次的PCR,阈值线一般不一样。
3.软件一般都可以根据某此PCR里所有样品的扩增曲线,自动设置阈值线。一般就用软件自动设置的就ok啦。

说得不是很详细,因为我觉得阈值的定义啥的你一定很清楚了。如果还不清楚就再问我吧

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-26 at 16:26 ]
2楼2011-04-26 16:22:28
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tank1917

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
hubeilj1108(金币+1): 2011-04-26 19:09:12
还真没调过,但是不同板的阈值是不一样的,也没有必要手动调。LZ可以看看这个http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm
3楼2011-04-26 16:30:04
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sxxuan

金虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
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Originally posted by tank1917 at 2011-04-26 16:30:04:
还真没调过,但是不同板的阈值是不一样的,也没有必要手动调。LZ可以看看这个http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm

顶这个链接,呵呵
4楼2011-04-26 16:53:15
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475502411

铜虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
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Originally posted by hubeilj1108 at 2011-04-26 15:25:35:
我们做荧光定量CT值有一个阈值线,这个阈值线可以手动调吗?相同的基因我们需要把阈值线调到一个一个标准吗?那么这样手动调以后那么多板都要调的话会不会很麻烦,我想问那个机器自动生成的阈值线会不会相同的基因 ...

楼主说的挺详细的,我也知道阈值是可以调的,我有个问题:如果计算基因的相对表达量,也设有内参基因,不同版子跑出来的结果可以使用同一个参照样的ct值嘛?
5楼2011-04-26 18:53:36
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
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Originally posted by 475502411 at 2011-04-26 18:53:36:
楼主说的挺详细的,我也知道阈值是可以调的,我有个问题:如果计算基因的相对表达量,也设有内参基因,不同版子跑出来的结果可以使用同一个参照样的ct值嘛?

你说的不同板子是指不同次的PCR吧?这个是不可以的哦。PCR是一个灵敏的反应,起始条件的细微改变都会造成很大的变化,而且影响PCR的因素很多,所以只有同一次跑的PCR样品才能比较。相对定量的话,如果没有内参也是可以比较的。内参可以矫正样品量的差异,如果精度要求不高,也是可以省的。但是如果要发表文章,内参基因是需要的。
6楼2011-04-26 20:02:06
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475502411

铜虫 (著名写手)



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Originally posted by 西瓜 at 2011-04-26 20:02:06:
你说的不同板子是指不同次的PCR吧?这个是不可以的哦。PCR是一个灵敏的反应,起始条件的细微改变都会造成很大的变化,而且影响PCR的因素很多,所以只有同一次跑的PCR样品才能比较。相对定量的话,如果没有内参 ...

哦,内参是消除样品之间的误差,不能平衡各批次PCR之间的差异,是吧?
7楼2011-04-26 20:57:49
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引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-04-26 20:57:49:
哦,内参是消除样品之间的误差,不能平衡各批次PCR之间的差异,是吧?

嗯,就是这样,呵呵~
8楼2011-04-27 11:10:35
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475502411

铜虫 (著名写手)



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收获不小,在此谢谢!!!!!
9楼2011-04-27 15:01:28
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