应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
201/1返回列表
查看: 3190  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[交流] 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！

荧光定量PCR标准品的问题
我自己用质粒做的标准品，可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办，还有标准品在4度好，还是-20好，如果4度能保存多长时间
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-12-14 12:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fajiaoren

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
laoyisng1122(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-14 16:02:07
-20度好，检查你的试剂，哪个公司的，质量如果。4度要尽快用，几天应该是可以的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-12-14 15:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): Ct值每次PCR都会有差别的，而且跟阈值设置也有关。不知道楼主说的差别有多大…… 2011-12-15 23:34:52
有变化能变多少呀？阈值设定一致的么？
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-12-14 19:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cloverplm

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-15 23:35:07

你的标准品稀释得准确么？
要不测一下质粒的浓度吧，如果稀释得不准确标准曲线不可能做得好的。
另外样品还是分装了放-20℃吧，做荧光定量加样要特别注意的，因为一般质粒浓度都很大，加样稍有偏差对结果都有很大影响。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-12-14 22:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yambog

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
加油啊，好好找找原因....
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-12-15 03:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiuwei001

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
用什么稀释的标准品，好像有专门稀释标准品的solution
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-12-15 08:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你所说的CT值变化是指标准品的标准曲线的CT值变化吗？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-12-15 08:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fajiaoren at 2011-12-14 15:33:23:
-20度好，检查你的试剂，哪个公司的，质量如果。4度要尽快用，几天应该是可以的。

还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
赞一下 回复此楼
8楼2011-12-15 10:34:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ccharlien at 2011-12-14 19:09:25:
有变化能变多少呀？阈值设定一致的么？
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧

还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
赞一下 回复此楼
9楼2011-12-15 10:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cloverplm at 2011-12-14 22:48:04:

你的标准品稀释得准确么？
要不测一下质粒的浓度吧，如果稀释得不准确标准曲线不可能做得好的。
另外样品还是分装了放-20℃吧，做荧光定量加样要特别注意的，因为一般质粒浓度都很大，加样稍有偏差对结 ...

还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
赞一下 回复此楼
10楼2011-12-15 10:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by beautybanana at 2011-12-15 08:51:02:
你所说的CT值变化是指标准品的标准曲线的CT值变化吗？

还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
赞一下 回复此楼
11楼2011-12-15 10:35:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lycq

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
希望看到高人的解答，我也遇到了同样的问题
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-12-15 10:47:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): good 2011-12-15 23:43:51
引用回帖:
9楼: Originally posted by laoyisng1122 at 2011-12-15 10:34:44:
还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致

用斜率算一下扩增效率
既然你有两根标准曲线 就可以用标准曲线做相对定量 比delta delta Ct 的方法更符合实际 不用考虑效率不同的问题
赞一下(2人) 回复此楼
13楼2011-12-15 15:15:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleimin

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
学习中 希望楼主早日解决问题
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2011-12-15 18:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cloverplm

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by laoyisng1122 at 2011-12-15 10:34:55:
还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致

要证明检测效率差不多，估计只能做多次重复试验了，然后你用统计学方法对结果进行分析，看看P值，判断差异是不是不显著。

统计学分析，偶当初论文的痛处，折腾死我了，祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2011-12-15 20:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhlasiI

铁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
关注一下。
回复此楼
16楼2011-12-20 11:14:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ccharlien at 2011-12-15 15:15:24:
用斜率算一下扩增效率
既然你有两根标准曲线 就可以用标准曲线做相对定量 比delta delta Ct 的方法更符合实际 不用考虑效率不同的问题

首先谢谢诸位热心回答
做标准品的时候，两个质粒都测OD值了，因为我最后要计算同一样本两个基因的值的比，如果二者扩增效率不一致，怎么进行计算啊。我现在做的其中一个基因在10 8 copies/ul的时候CT值在8左右，斜率是2.9-3左右，而另一基因同等浓度的时候CT值在10左右，斜率是3.3-3.5，已经做过两次了，都是这样，这是什么原因呢？
赞一下 回复此楼
17楼2011-12-20 11:15:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by cloverplm at 2011-12-15 20:48:56:
要证明检测效率差不多，估计只能做多次重复试验了，然后你用统计学方法对结果进行分析，看看P值，判断差异是不是不显著。

统计学分析，偶当初论文的痛处，折腾死我了，祝你好运！

首先谢谢诸位热心回答
做标准品的时候，两个质粒都测OD值了，因为我最后要计算同一样本两个基因的值的比，如果二者扩增效率不一致，怎么进行计算啊。我现在做的其中一个基因在10 8 copies/ul的时候CT值在8左右，斜率是2.9-3左右，而另一基因同等浓度的时候CT值在10左右，斜率是3.3-3.5，已经做过两次了，都是这样，这是什么原因呢？
赞一下 回复此楼
18楼2011-12-20 11:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by laoyisng1122 at 2011-12-20 11:15:18:
首先谢谢诸位热心回答
做标准品的时候，两个质粒都测OD值了，因为我最后要计算同一样本两个基因的值的比，如果二者扩增效率不一致，怎么进行计算啊。我现在做的其中一个基因在10 8 copies/ul的时候CT值在8左右， ...

效率不一致是很正常的 一般来说你的引物和探针确定了之后 扩增效率就差不多定下来了 不同的反应体系会对其有一定程度的影响 你可以尝试一下
计算很容易啊 有标准曲线就不用CT值算了 用标准曲线的方法做相对定量
而且你用质粒做的标准品可以做绝对定量了 何必纠结CT值
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2011-12-20 21:50:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
鎴戞兂闂竴涓嬶紝浣犵殑鏍囧噯鍝?鍘诲摢寮勫埌鐨勫憖
赞一下 回复此楼
20楼2012-12-25 14:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 laoyisng1122 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +7 水星记infp 2026-04-05 7/350 2026-04-06 00:57 by fmesaito
[考研] 材料334求调剂 +18 Eecho# 2026-04-03 18/900 2026-04-06 00:56 by fmesaito
[考研] 求调剂 +7 张zic 2026-04-05 8/400 2026-04-05 22:57 by Hdyxbekcb
[考研] 求调剂 +6 chenxrlkx 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:05 by imissbao
[考研] 329求调剂 +17 miaodesi 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 18:33 by 蓝云思雨
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +6 残星拂曙 2026-03-31 6/300 2026-04-05 12:15 by rainbow11
[考研] 电子信息调剂交叉学科有推荐吗 +6 jhtfeybgj 2026-04-01 9/450 2026-04-05 11:13 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +3 电气小神童 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:17 by barlinike
[考研] 本科211 分数293请求调剂 +4 莲菜就是藕吧 2026-04-01 4/200 2026-04-04 22:32 by hemengdong
[考研] 材料科学与工程调剂 +19 深V宿舍吧 2026-03-30 20/1000 2026-04-04 22:13 by hemengdong
[考研] 求调剂 +6 朔朔话 2026-04-02 7/350 2026-04-04 19:16 by 蓝云思雨
[考研] 334求调剂 +9 Trying] 2026-03-31 9/450 2026-04-03 15:18 by 琢珥丶
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358 +4 cs0106 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:41 by 百灵童888
[考研] 274求调剂 +10 薛定谔的虎。 2026-04-01 10/500 2026-04-03 10:13 by tianyyysss
[考研] 085600 295分求调剂 +19 W55j 2026-03-30 23/1150 2026-04-03 09:53 by 千千运气
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭