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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)


[交流] 做了几次PCR CT值都有变化怎么办?谢谢大家!!

荧光定量PCR标准品的问题
我自己用质粒做的标准品,可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办,还有标准品在4度好,还是-20好,如果4度能保存多长时间
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by cloverplm at 2011-12-15 20:48:56:
要证明检测效率差不多,估计只能做多次重复试验了,然后你用统计学方法对结果进行分析,看看P值,判断差异是不是不显著。

统计学分析,偶当初论文的痛处,折腾死我了,祝你好运!

首先谢谢诸位热心回答
做标准品的时候,两个质粒都测OD值了,因为我最后要计算同一样本两个基因的值的比,如果二者扩增效率不一致,怎么进行计算啊。我现在做的其中一个基因在10 8 copies/ul的时候CT值在8左右,斜率是2.9-3左右,而另一基因同等浓度的时候CT值在10左右,斜率是3.3-3.5,已经做过两次了,都是这样,这是什么原因呢?
18楼2011-12-20 11:15:28
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fajiaoren

铜虫 (初入文坛)


★ ★ ★
laoyisng1122(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-14 16:02:07
-20度好,检查你的试剂,哪个公司的,质量如果。4度要尽快用,几天应该是可以的。
2楼2011-12-14 15:33:23
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ccharlien

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+1): Ct值每次PCR都会有差别的,而且跟阈值设置也有关。不知道楼主说的差别有多大…… 2011-12-15 23:34:52
有变化能变多少呀?阈值设定一致的么?
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧
3楼2011-12-14 19:09:25
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cloverplm

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-15 23:35:07

你的标准品稀释得准确么?
要不测一下质粒的浓度吧,如果稀释得不准确标准曲线不可能做得好的。
另外样品还是分装了放-20℃吧,做荧光定量加样要特别注意的,因为一般质粒浓度都很大,加样稍有偏差对结果都有很大影响。
4楼2011-12-14 22:48:04
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