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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[交流] 做了几次PCR CT值都有变化怎么办？谢谢大家！！

荧光定量PCR标准品的问题
我自己用质粒做的标准品，可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办，还有标准品在4度好，还是-20好，如果4度能保存多长时间
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1楼 2011-12-14 12:11:15
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ccharlien at 2011-12-14 19:09:25:
有变化能变多少呀？阈值设定一致的么？
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧

还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
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9楼2011-12-15 10:34:44
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fajiaoren

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
laoyisng1122(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-14 16:02:07
-20度好，检查你的试剂，哪个公司的，质量如果。4度要尽快用，几天应该是可以的。
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2楼2011-12-14 15:33:23
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): Ct值每次PCR都会有差别的，而且跟阈值设置也有关。不知道楼主说的差别有多大…… 2011-12-15 23:34:52
有变化能变多少呀？阈值设定一致的么？
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-12-14 19:09:25
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-15 23:35:07

你的标准品稀释得准确么？
要不测一下质粒的浓度吧，如果稀释得不准确标准曲线不可能做得好的。
另外样品还是分装了放-20℃吧，做荧光定量加样要特别注意的，因为一般质粒浓度都很大，加样稍有偏差对结果都有很大影响。
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4楼2011-12-14 22:48:04
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