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做了几次PCR CT值都有变化怎么办?谢谢大家!!
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laoyisng1122
铁虫
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[交流]
做了几次PCR CT值都有变化怎么办?谢谢大家!!
荧光定量PCR标准品的问题
我自己用质粒做的标准品,可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办,还有标准品在4度好,还是-20好,如果4度能保存多长时间
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1楼
2011-12-14 12:11:15
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ccharlien
木虫
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+1): good 2011-12-15 23:43:51
引用回帖:
9楼
:
Originally posted by
laoyisng1122
at 2011-12-15 10:34:44:
还有我要同时测两个基因,怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
我是做了两个标准品,可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢?以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
用斜率算一下扩增效率
既然你有两根标准曲线 就可以用标准曲线做相对定量 比delta delta Ct 的方法更符合实际 不用考虑效率不同的问题
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13楼
2011-12-15 15:15:24
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fajiaoren
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laoyisng1122(金币
+1
):谢谢参与
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-14 16:02:07
-20度好,检查你的试剂,哪个公司的,质量如果。4度要尽快用,几天应该是可以的。
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2楼
2011-12-14 15:33:23
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ccharlien
木虫
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西瓜(金币+1): Ct值每次PCR都会有差别的,而且跟阈值设置也有关。不知道楼主说的差别有多大…… 2011-12-15 23:34:52
有变化能变多少呀?阈值设定一致的么?
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧
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3楼
2011-12-14 19:09:25
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cloverplm
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西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-15 23:35:07
你的标准品稀释得准确么?
要不测一下质粒的浓度吧,如果稀释得不准确标准曲线不可能做得好的。
另外样品还是分装了放-20℃吧,做荧光定量加样要特别注意的,因为一般质粒浓度都很大,加样稍有偏差对结果都有很大影响。
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4楼
2011-12-14 22:48:04
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