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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮忙分析一下PCR电泳图
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piggpi

金虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙分析一下PCR电泳图

提鳗鱼总ＲＮＡ后直接ＲＴ，接下来的PCR电泳结果如图。
我要的条带在３３０ｂｐ。可基本是非特异性条带。
我做的是小清蛋白克隆，以前克隆其他鱼的时候也是用同样的引物，以前没这种情况出现，有没有可能是引物降解了？
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在很久很久以前
1楼 2011-04-20 16:18:10
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good 2011-04-20 17:16:36
piggpi(金币+2): 感谢参与！！！ 2011-04-21 10:22:01
你把引物做个空对照试试，就是不加模板，另外把退火温度提高点再扩增试试
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在等待中涅槃重生
2楼2011-04-20 16:20:52
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by piggpi at 2011-04-20 16:18:10:
提鳗鱼总ＲＮＡ后直接ＲＴ，接下来的PCR电泳结果如图。
我要的条带在３３０ｂｐ。可基本是非特异性条带。
我做的是小清蛋白克隆，以前克隆其他鱼的时候也是用同样的引物，以前没这种情况出现，有没有可能是引物 ...

看不到图片……不知道是不是我的问题……
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3楼2011-04-20 17:17:16
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piggpi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-20 16:20:52:
你把引物做个空对照试试，就是不加模板，另外把退火温度提高点再扩增试试

我去试试。。。。
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在很久很久以前
4楼2011-04-20 18:40:35
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piggpi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-20 17:17:16:
看不到图片……不知道是不是我的问题……

可能是浏览器问题，我这是确定上传了，我再传张你看看
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在很久很久以前
5楼2011-04-20 18:41:54
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piggpi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-20 16:20:52:
你把引物做个空对照试试，就是不加模板，另外把退火温度提高点再扩增试试

我做了引物空对照，结果也是有很多非特异性条带， 这作何解释？
我想再提高退火温度试试 ，引物才23bp，3月上旬合成的，应该不至于降解啊。。。。。
求高人指教！
现在没照片，明天上传！
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在很久很久以前
6楼2011-04-20 23:47:12
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-21 08:49:28
piggpi(金币+1): 感谢参与！！！ 2011-04-21 10:22:23
用备用的引物吧，把水也换了，有东西污染了
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在等待中涅槃重生
7楼2011-04-21 00:27:12
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piggpi

金虫 (小有名气)
如图：
第一泳道是50bp的M，第4道是不加模板空对照，第5道所用引物为重新稀释的
第4道也有多条条带，那就是说引物肯定污染了。是这样吗？
还有学姐的意思是说后面四道上面的亮带是一样的，是染料对迁移率有影响。
那染料的影响不应该是一样的吗？为什么条带的位置会不一样？
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在很久很久以前
8楼2011-04-21 12:27:47
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zxy7576

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): 很活跃，鼓励 2011-04-22 13:54:38
第四道不加模板的空对照都那么多条带，有可能是你提取的RNA有问题，建议重新提取；
染料对迁移率的影响应该是一样的呀，你那几个条带不在同一位置，有可能是你胶做的有问题，胶孔不一致；也有可能是其实那几个根本就不是同一个东西（不过好像3和5是一样高的吧？只有2不一样）；
个人认为跟你提取的RNA不纯或者提取效果不好有关系，建议重新提取；
引物的问题应该不大吧，另外太高的退火温度也不见得好吧~
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不论什么时候，什么处境，都不要忘记自己最初的梦想！
9楼2011-04-22 13:22:19
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tianchongmy

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励新虫交流。不过多弄几套引物很麻烦呢，呵呵 2011-04-22 17:32:44
多设计几套引物，用不同梯度退火试一下
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10楼2011-04-22 13:56:09
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