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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNA反转录问题
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荣rong006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA反转录问题

各位虫友帮忙分析一下：我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀？
RNA提的质量还可以，也除了基因组的。图如下
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1楼 2011-03-18 14:53:05
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
LZ做的是两步法的RT-PCR吗？

我当时只对RNA的结果做了电泳，RT之后，得到的CDNA的量很少，没有做电泳。直接加入引物进行PCR。

你有尝试加入引物PCR之后进行电泳吗？不排除成功的可能性。
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2楼2011-03-18 21:07:23
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
楼主不妨做一下RT-PCR试一下！
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3楼2011-03-18 21:08:35
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★ ★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:40:59
第一链合成就电泳，很少有人这样做呀！要一气呵成，完成反转录再电泳。
你这种情况可能是单链的CDNA不稳定的缘故吧!
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4楼2011-03-18 22:20:38
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荣rong006

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冬虫夏草1 at 2011-03-18 22:20:38:
第一链合成就电泳，很少有人这样做呀！要一气呵成，完成反转录再电泳。
你这种情况可能是单链的CDNA不稳定的缘故吧!

谢谢各位虫友，我就试着做下去看看
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5楼2011-03-19 09:35:06
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gwd0312

木虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
做好反转录完了之后用内参基因检测一下，你这样操作很少见的！
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6楼2011-03-19 10:49:44
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
这个恐怕是你的RNA提取质量的问题，你确定RNA没有问题的话，检查一下反转录试剂盒是不是出了问题。最好把你的RNA电泳图片传上来，让大家看一下，这样有助于分析原因的
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7楼2011-03-19 13:54:56
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jjwl_rscn

金虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
走过路过不要错过
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8楼2011-03-19 15:08:28
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zhangby2002

银虫 (小有名气)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 荣rong006 at 2011-03-18 14:53:05:
各位虫友帮忙分析一下：我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀？
RNA提的质量还可以，也除了基因组的。图如下

本人分析一下：1,你提取的RNA核算定量吗?跑电泳吗？RNA提取要求严格，切记防止污染。2, 在做反转录时要进行DNA的去除3RT-PCR 时，要求比较严格，反转录试剂防止污染。3 感觉你的带好像引物二聚体，反转失败。
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9楼2011-03-19 15:39:48
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shenlang007

木虫 (小有名气)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
rna的纯度如何？
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11楼2011-03-19 16:57:54
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
浪费模板，败家啊，哈哈
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12楼2011-03-19 20:17:14
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
电泳出来后怎么又好几段啊
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13楼2011-03-19 20:23:24
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_然然

金虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 荣rong006 at 2011-03-18 14:53:05:
各位虫友帮忙分析一下：我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀？
RNA提的质量还可以，也除了基因组的。图如下

我都用第一链的CDNA的，应该比你的要大，应该是整个泳道弥散的状态，你的太小有点问题，如果提取和纯化没有问题就是反转录过程的问题了。
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14楼2011-03-19 23:16:01
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maxiao10086

木虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
楼主。。。
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16楼2011-03-19 23:24:42
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
反转录前RNA与OligodT要72度5分钟，消除RNA二级结构，有利于引物的结合；或者是反转录酶效率不高，换吧
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17楼2011-03-21 20:41:35
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过氧化氢

铁虫 (初入文坛)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
建议把反转录做完在电泳
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18楼2011-03-24 10:50:00
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
量太少了
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19楼2011-03-24 10:56:33
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circlewu

禁虫 (职业作家)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
20楼2011-03-24 11:07:31
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
呵呵呵，楼上的都说了
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22楼2011-03-24 13:17:45
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
★
荣rong006(金币+1): 谢谢参与
用内参基因验证一下
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荣rong006
24楼2012-05-17 08:53:18
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简单回复
媛媛122310楼
2011-03-19 15:50   回复  
荣rong006(金币+1):谢谢参与
tsingsoon15楼
2011-03-19 23:23   回复  
荣rong006(金币+1):谢谢参与
tangyanxmc21楼
2011-03-24 11:09   回复  
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piaoyunokok23楼
2012-02-19 10:55   回复  
荣rong006(金币+1):谢谢参与
荣rong00625楼
2012-05-18 09:13   回复  
送鲜花一朵
引用回帖:
1356656楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 08:53:18: 用内参基因验证一下

gdj36370204326楼
2012-11-17 16:30   回复  
荣rong006(金币+1): 谢谢参与
gdj36370204327楼
2012-11-17 16:56   回复  
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