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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNA反转录问题
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荣rong006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA反转录问题

各位虫友帮忙分析一下：我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀？
RNA提的质量还可以，也除了基因组的。图如下
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1楼 2011-03-18 14:53:05
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zhangby2002

银虫 (小有名气)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 荣rong006 at 2011-03-18 14:53:05:
各位虫友帮忙分析一下：我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀？
RNA提的质量还可以，也除了基因组的。图如下

本人分析一下：1,你提取的RNA核算定量吗?跑电泳吗？RNA提取要求严格，切记防止污染。2, 在做反转录时要进行DNA的去除3RT-PCR 时，要求比较严格，反转录试剂防止污染。3 感觉你的带好像引物二聚体，反转失败。
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9楼2011-03-19 15:39:48
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
LZ做的是两步法的RT-PCR吗？

我当时只对RNA的结果做了电泳，RT之后，得到的CDNA的量很少，没有做电泳。直接加入引物进行PCR。

你有尝试加入引物PCR之后进行电泳吗？不排除成功的可能性。
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2楼2011-03-18 21:07:23
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
楼主不妨做一下RT-PCR试一下！
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3楼2011-03-18 21:08:35
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★ ★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:40:59
第一链合成就电泳，很少有人这样做呀！要一气呵成，完成反转录再电泳。
你这种情况可能是单链的CDNA不稳定的缘故吧!
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4楼2011-03-18 22:20:38
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