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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录已有8人参与

请高手出手相救啊
提取血液RNA的浓度很低，用于下面的20ul反转录体系（最大的rna量不能超过1ug），我是900ng的rna来反转录，提取rna浓度太低，加入的rna体积会超过20ul体系，怎么办。
我也尝试过将2管获得的血液组织合并成一管，离心去上清，取下面的（应该含有很多血细胞），然后加1ml trizol提取rna，可是还是很低。
如果血液不离心的话那么我们用的一般的ep管里就盛不下1mltrizol和血液了，那如果血液很多，trizol很少（小于1ul）的话可能也提不好吧。
可不可以找一个大一点的ep管，然后将几管的血液合并在这个管子里，然后再加适量trizol来提取rna。
请各位高手哥哥姐姐指点一二，小弟不尽感激。
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三人行必有我师
1楼2010-12-19 12:54:10
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

建议

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):浓缩是一个方法 2010-12-21 11:46:37
多提几管之后用乙醇沉淀，加少量水溶解
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未来天空才是极限
2楼2010-12-19 19:39:47
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

多谢回复，请看我的思路可行否

引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-12-19 19:39:47:
多提几管之后用乙醇沉淀，加少量水溶解

我 的血液组织材料较少，分成好几管来提肯定会损失很多。我可以找一个大的ep管如2ml，把几管血液材料都并在这一个管里，只加很少的trizol来提取，这样就会损失少一些，可以吗？请问trizol加入少量如0.2ul，可以吧，谢谢 ，请指教
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三人行必有我师
3楼2010-12-20 10:15:47
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

TRIZOL太少

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-20 15:42:00
RNA提的质量应该不好。RT对RNA质量要求还是挺高的
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未来天空才是极限
4楼2010-12-20 14:07:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-20 15:42:14
做PCR的话，安啦~最后都放大几百万倍，能做出来的
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5楼2010-12-20 14:09:31
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

血液提取需要液氮研磨吗

引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-12-20 14:07:32:
RNA提的质量应该不好。RT对RNA质量要求还是挺高的

血液提取rna，用液氮研磨血液冷冻固态 是不是比直接在血液溶液中加trizol效果好啊  谢谢
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三人行必有我师
6楼2010-12-20 14:40:56
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-20 15:42:26
RT产物做PCR的话没必要纠结RNA的量太少
只要提取、RT、PCR过程没问题的话，该有就会有的

只不过是一旦没有出现期望的结果时，会考虑到有可能是这方面的因素
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7楼2010-12-20 14:44:31
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

好的谢谢

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-12-20 14:44:31:
RT产物做PCR的话没必要纠结RNA的量太少
只要提取、RT、PCR过程没问题的话，该有就会有的

只不过是一旦没有出现期望的结果时，会考虑到有可能是这方面的因素

好的 谢谢
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三人行必有我师
8楼2010-12-20 14:46:55
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宁夏8083

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-21 08:29:00
你提的是全血RNA?可是一般的都是替PBMC或白细胞的RNA啊。要是这样的话，你可以把红细胞裂解以后将白细胞收集到一个EP管中再提，Trizol的量不能太少，否则会影响RNA的提取效率的。如果是提取血浆中的病毒RNA，那你可以将血浆或血清单分出来再提啊。另外，象楼上所说，不要太计较总量的，因为还有反转录的步骤，所得产物足够你用了，还有就是找一个较高转录效率的反转录酶也就OK了
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9楼2010-12-20 19:38:35
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宁夏8083

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你提的是全血RNA?可是一般的都是替PBMC或白细胞的RNA啊。要是这样的话，你可以把红细胞裂解以后将白细胞收集到一个EP管中再提，Trizol的量不能太少，否则会影响RNA的提取效率的。如果是提取血浆中的病毒RNA，那你可以将血浆或血清单分出来再提啊。另外，象楼上所说，不要太计较总量的，因为还有反转录的步骤，所得产物足够你用了，还有就是找一个较高转录效率的反转录酶也就OK了
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10楼2010-12-20 21:45:16
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