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chendarid0

银虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录已有8人参与

请高手出手相救啊
提取血液RNA的浓度很低，用于下面的20ul反转录体系（最大的rna量不能超过1ug），我是900ng的rna来反转录，提取rna浓度太低，加入的rna体积会超过20ul体系，怎么办。
我也尝试过将2管获得的血液组织合并成一管，离心去上清，取下面的（应该含有很多血细胞），然后加1ml trizol提取rna，可是还是很低。
如果血液不离心的话那么我们用的一般的ep管里就盛不下1mltrizol和血液了，那如果血液很多，trizol很少（小于1ul）的话可能也提不好吧。
可不可以找一个大一点的ep管，然后将几管的血液合并在这个管子里，然后再加适量trizol来提取rna。
请各位高手哥哥姐姐指点一二，小弟不尽感激。

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三人行必有我师

1楼 2010-12-19 12:54:10

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宁夏8083

铁杆木虫 (正式写手)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-21 08:29:00

你提的是全血RNA?可是一般的都是替PBMC或白细胞的RNA啊。要是这样的话，你可以把红细胞裂解以后将白细胞收集到一个EP管中再提，Trizol的量不能太少，否则会影响RNA的提取效率的。如果是提取血浆中的病毒RNA，那你可以将血浆或血清单分出来再提啊。另外，象楼上所说，不要太计较总量的，因为还有反转录的步骤，所得产物足够你用了，还有就是找一个较高转录效率的反转录酶也就OK了