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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):很活跃，注意休息。 2010-12-21 08:29:24
1，原料加量

2，rna样品浓缩
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11楼2010-12-21 03:21:15
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

好的 谢谢 样品浓缩的含义是这样吗

引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 03:21:15:
1，原料加量

2，rna样品浓缩

好的 谢谢指教   样品浓缩是指离心去上清，要下面的部分 是吧
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三人行必有我师
12楼2010-12-21 11:20:49
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

好的 谢谢 我提的是全血RNA

引用回帖:
Originally posted by 宁夏8083 at 2010-12-20 21:45:16:
你提的是全血RNA?可是一般的都是替PBMC或白细胞的RNA啊。要是这样的话，你可以把红细胞裂解以后将白细胞收集到一个EP管中再提，Trizol的量不能太少，否则会影响RNA的提取效率的。如果是提取血浆中的病毒RNA，那你 ...

我提的是全血RNA，没有白细胞，红细胞这么复杂，只要按照正常的提取就可以了，要求不高的。我想也按照正常组织那样液氮研磨提取，或许会好一些
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三人行必有我师
13楼2010-12-21 11:22:42
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-22 11:45:05
引用回帖:
Originally posted by chendarid0 at 2010-12-21 11:20:49:

好的 谢谢指教   样品浓缩是指离心去上清，要下面的部分 是吧

对，RNA可以用异丙醇或无水乙醇沉淀的，具体方法可见《分子克隆》，或者invitrogen 公司trizol试剂的说明书，都有操作步骤
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14楼2010-12-21 13:09:32
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

谢谢 我晓得了

引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-21 13:09:32:



对，RNA可以用异丙醇或无水乙醇沉淀的，具体方法可见《分子克隆》，或者invitrogen 公司trizol试剂的说明书，都有操作步骤

谢谢啊
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三人行必有我师
15楼2010-12-22 11:24:29
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换份浓度高的样本去做呀
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供应PCR增量剂
16楼2010-12-22 13:47:31
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fzwish20000

新虫 (初入文坛)
博奥生物芯片北京国家工程研究中心：
我们比较了不同公司的产品后，认为北京百泰克生物公司生产的TRI pure LS Reagent用于全血有核细胞的RNA抽提效果较好，可以满足基因表达谱芯片的分析要求。一般1ml的全血可以得到10μg左右的total RNA，足够满足芯片分析的需要。

在临床上采血时，可以先把TRI pure LS Reagent分装750ul到1.5ml的离心管中。血液样本可以先抗凝处理（EDTA抗凝或者其他抗凝方式都可），然后取250ul全血样品加入到750ul的TRI pure LS Reagent中，用移液枪反复抽打并振荡混匀，在室温裂解5min-10min，直至血细胞充分发生裂解。然后可把此裂解液保存在-20℃下可达2个月，-80℃可达半年。在此期间，可以把该裂解液运输到博奥生物公司进行RNA的抽提，运输过程可以4℃ 1天，-20℃ 一周。
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17楼2011-06-15 17:26:44
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