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chendarid0

银虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

[交流] 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录已有8人参与

请高手出手相救啊
提取血液RNA的浓度很低，用于下面的20ul反转录体系（最大的rna量不能超过1ug），我是900ng的rna来反转录，提取rna浓度太低，加入的rna体积会超过20ul体系，怎么办。
我也尝试过将2管获得的血液组织合并成一管，离心去上清，取下面的（应该含有很多血细胞），然后加1ml trizol提取rna，可是还是很低。
如果血液不离心的话那么我们用的一般的ep管里就盛不下1mltrizol和血液了，那如果血液很多，trizol很少（小于1ul）的话可能也提不好吧。
可不可以找一个大一点的ep管，然后将几管的血液合并在这个管子里，然后再加适量trizol来提取rna。
请各位高手哥哥姐姐指点一二，小弟不尽感激。

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三人行必有我师

1楼2010-12-19 12:54:10

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fzwish20000

新虫 (初入文坛)

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博奥生物芯片北京国家工程研究中心：
我们比较了不同公司的产品后，认为北京百泰克生物公司生产的TRI pure LS Reagent用于全血有核细胞的RNA抽提效果较好，可以满足基因表达谱芯片的分析要求。一般1ml的全血可以得到10μg左右的total RNA，足够满足芯片分析的需要。

在临床上采血时，可以先把TRI pure LS Reagent分装750ul到1.5ml的离心管中。血液样本可以先抗凝处理（EDTA抗凝或者其他抗凝方式都可），然后取250ul全血样品加入到750ul的TRI pure LS Reagent中，用移液枪反复抽打并振荡混匀，在室温裂解5min-10min，直至血细胞充分发生裂解。然后可把此裂解液保存在-20℃下可达2个月，-80℃可达半年。在此期间，可以把该裂解液运输到博奥生物公司进行RNA的抽提，运输过程可以4℃ 1天，-20℃ 一周。