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chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提血液RNA浓度很低,怎样使其浓度高从而用于反转录 已有8人参与

请高手出手相救啊
提取血液RNA的浓度很低,用于下面的20ul反转录体系(最大的rna量不能超过1ug),我是900ng的rna来反转录,提取rna浓度太低,加入的rna体积会超过20ul体系,怎么办。
我也尝试过将2管获得的血液组织合并成一管,离心去上清,取下面的(应该含有很多血细胞),然后加1ml trizol提取rna,可是还是很低。
如果血液不离心的话那么我们用的一般的ep管里就盛不下1mltrizol和血液了,那如果血液很多,trizol很少(小于1ul)的话可能也提不好吧。
可不可以找一个大一点的ep管,然后将几管的血液合并在这个管子里,然后再加适量trizol来提取rna。
请各位高手哥哥姐姐指点一二,小弟不尽感激。
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三人行必有我师
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-22 11:45:05
引用回帖:
Originally posted by chendarid0 at 2010-12-21 11:20:49:

好的 谢谢指教   样品浓缩是指离心去上清,要下面的部分 是吧

对,RNA可以用异丙醇或无水乙醇沉淀的,具体方法可见《分子克隆》,或者invitrogen 公司trizol试剂的说明书,都有操作步骤
14楼2010-12-21 13:09:32
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

建议

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):浓缩是一个方法 2010-12-21 11:46:37
多提几管之后用乙醇沉淀,加少量水溶解
未来天空才是极限
2楼2010-12-19 19:39:47
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

多谢回复,请看我的思路可行否

引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-12-19 19:39:47:
多提几管之后用乙醇沉淀,加少量水溶解

我 的血液组织材料较少,分成好几管来提肯定会损失很多。我可以找一个大的ep管如2ml,把几管血液材料都并在这一个管里,只加很少的trizol来提取,这样就会损失少一些,可以吗?请问trizol加入少量如0.2ul,可以吧,谢谢 ,请指教
三人行必有我师
3楼2010-12-20 10:15:47
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

TRIZOL太少

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-20 15:42:00
RNA提的质量应该不好。RT对RNA质量要求还是挺高的
未来天空才是极限
4楼2010-12-20 14:07:32
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