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荣rong006

新虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于RNA反转录问题

各位虫友帮忙分析一下:我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀?
RNA提的质量还可以,也除了基因组的。图如下
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_然然

金虫 (正式写手)


★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 荣rong006 at 2011-03-18 14:53:05:
各位虫友帮忙分析一下:我合成cDNA第一条链电泳图弥散带范围怎么在100bp以下呀?
RNA提的质量还可以,也除了基因组的。图如下

我都用第一链的CDNA的,应该比你的要大,应该是整个泳道弥散的状态,你的太小有点问题,如果提取和纯化没有问题就是反转录过程的问题了。
14楼2011-03-19 23:16:01
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)


★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
LZ做的是两步法的RT-PCR吗?

我当时只对RNA的结果做了电泳,RT之后,得到的CDNA的量很少,没有做电泳。直接加入引物进行PCR。

你有尝试加入引物PCR之后进行电泳吗?不排除成功的可能性。
2楼2011-03-18 21:07:23
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★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
楼主不妨做一下RT-PCR试一下!
3楼2011-03-18 21:08:35
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)


★ ★
荣rong006(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:40:59
第一链合成就电泳,很少有人这样做呀!要一气呵成,完成反转录再电泳。
你这种情况可能是单链的CDNA不稳定的缘故吧!
4楼2011-03-18 22:20:38
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